проу
Продукти
Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG HCB5144E Представено изображение
  • Fast Ampli RT-qPCR Премикс плюс-UNG HCB5144E
  • Fast Ampli RT-qPCR Премикс плюс-UNG HCB5144E

Fast Ampli RT-qPCR Премикс плюс-UNG


Каталожен номер: HCB5144E

Опаковка: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Антитяло-модифициран горещ старт ензим, 95°C, 1-5 минути горещ старт

Мултиплексирано многоканално qPCR откриване на различни цели

Амплификация с висока чувствителност на шаблони на РНК с ниска концентрация

Бързо усилване

Описание на продукта

Подробности за продукта

Каталожен номер: HCB5144E

Fast Ampli RT-qPCR Premix plus-UNG е разработен специално за процеси на лиофилизация, прилага се за флуоресцентно количествено определяне (TaqMan сонда) откриване на РНК амплификация, съдържаща неокрипт обратна транскриптаза и бърза амплификация ДНК полимераза, получена чрез генетично модифицирана и скринираща, която може да завърши PCR амплификацията в рамките на 20 -40 минути.Този реагент предварително формира висока инхибиторна толерантност, която има по-висока обратна транскрипция и ефективност на PCR амплификация, подходяща за високочувствителна амплификация на РНК проби с ниска концентрация.Може да се получи добра стандартна крива в широк количествен диапазон и количественото определяне може да се извърши точно.Този реагент използва смесен ензим от ензим за антиинхибиращо усилване и UNG ензим, както и оптимизирана буферна система, съдържаща dUTP.Той може не само да постигне добра амплификация на целевия ген в проби, съдържащи инхибитори, но също така ефективно да предотврати фалшиво положително усилване, причинено от PCR остатъчно и аерозолно замърсяване.Този реагент е съвместим с повечето флуоресцентни количествени PCR инструменти, като Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche и т.н.Този реагент може да се използва за лиофилизация за получаване на добра лиофилизирана форма и стабилност на продукта.


  • Предишен:
  • Следващия:

  • Състав на реагента

    1. 12,5 × FastAmpli Part Taq/UNG микс (с dNTP) (DG)

    2. 50 × FastAmpli Part RTase (DG)

    3. 5 × FastAmpliRT буфер (DG)

    4. 4 × лиопротектор (по избор) (DG)

     

    Условия за съхранение

    Може да се съхранява при -20 ℃ за дългосрочен план, при 4 ℃ до 3 месеца.Разбъркайте добре преди употреба и избягвайтечесто замразяване-размразяване.

     

    Протокол за колоездене

     

    стъпка

     

    температура

    Редовен PCR Процедура

    Бърз PCRПроцедура

     

    Цикли

    Продължителност

    Продължителност

    ОбратенТранскрипция

    50 ℃

    15 мин

    5 минути

    задръжте

    ПолимеразаАктивиране

    95 ℃

    1-5 мин

    1-2 мин

    задръжте

    Денатуриране

    95 ℃

    10-20 s

    1-3 сек

    40-50

    Отгряване/удължаване

    56-64 ℃

    20-60 с

    3-20 сек

     

    RT-qPCR Liquid Reactйонна система

    Състав

    25 µL Сила на звука

    50µL Сила на звука

    Концентрация

    5 × FastAmpli RT буфер

    5µL

    10µL

    12,5×FastAmpli Part Taq/UNG микс (с dNTP)

    2µL

    4µL

    50 × FastAmpli Part RTase

    0,5 µL

    1µL

    4×лиопротектор

    6.25µL

    12,5 µL

    25×Смес праймер-сонда

    1µL

    2µL

    Матрична РНК

     

     

     

    ddH2O

    До 25 µL

    До 50 µL

    1. Тази система е система за лиофилизация;Когато клиентите използват тази система без изисквания за лиофилизация, може да се добави селективно 4 × лиопротектор;Ако има необходими лиофилизирани продукти, по време на валидирането на ефективността на продукта на етапа на течните реагенти, той трябва да добави 4 × лиопротектор, за да осигури съответствие с компонентите и ефектите на лиофилизираната система.

    2. Когато използвате обикновена PCR процедура, крайната концентрация на праймера обикновено е 0,2 μM.За по-добри резултати концентрацията на праймера може да бъде оптимизирана в диапазона от 0,2-1,0 μM.Концентрацията на сондата може да се оптимизира в диапазона от 0,1-0,3 μM.Могат да се извършат експерименти с градиент на концентрация, за да се намери най-добрата комбинация от праймери и сонди.

    3. Когато се използва метод за бърза PCR амплификация, може да се постигне по-добър резултат чрез увеличаване на концентрацията на праймера/сондата, както и чрез регулиране на процента на праймера и сондата.

    4. Различните типове шаблони съдържат различен брой копия на целевия ген.Може да се направи градиентно разреждане, за да се избере подходящо оптимално количество за добавяне на шаблон, ако е необходимо.

     

    Подготовка на системата за лиофилизация

    Състав

    25µL реакция Система

    5 × FastAmpli RT буфер

    5µL

    12,5 × FastAmpli Part Taq/UNG микс (с dNTP) (DG)

    2µL

    50 × FastAmpli Part RTase (DG)

    0,5 µL

    4×Лиопротектор

    6.25µL

    25×Смес праймер-сонда

    1µL

    ddH2O

    До 18~20µL

    * Ако са необходими други системи за лиофилизация, моля, консултирайте се отделно.

     

    Лиофилизация Procес

    Процедура

    темп.

    време

    Състояние

    налягане

     Замръзване

    4 ℃

    30 мин

    Задръжте

     1 атм

    -50 ℃

    60 мин

    Охлаждане

    -50 ℃

    180 мин

    Задръжте

     Първично сушене

    -30 ℃

    60 мин

    Отопление

     Краен вакуум

    -30 ℃

    720 мин

    Задръжте

    Вторично сушене

    25 ℃

    60 мин

    Отопление

     Краен вакуум

    25 ℃

    300 мин

    Задръжте

    1. Този процес на лиофилизация е процес на сушене чрез замразяване in situ за 25 µL реакционна система;ако се изискват гранули за сушене чрез замразяване или други процеси на сушене чрез замразяване на място, моля, попитайте отделно.

    2. Горният процес на лиофилизация е само за справка.Различните типове продукти и различните сублимационни сушилни имат различни параметри, така че могат да се правят корекции според действителните условия по време на употреба.

    3. Различни процеси на лиофилизация могат да бъдат подходящи за лиофилизирани продукти с различни размери на партиди, така че трябва да се извърши достатъчно валидиране на изпитване, когато се използва за широкомащабно производство.

     

    Инструкции за употреба на лиофилизаed прах

    1. За кратко центрофугирайте лиофилизирания прах;

    2. Добавете матрица нуклеинова киселина към лиофилизирания прах и добавете вода до 25 µL;

    3. Разбъркайте добре чрез центрофугиране и пуснете на машина.

     

    Контрол на качеството

    1. Функционално изследване: чувствителност, специфичност, възпроизводимост на RT-qPCR.

    2. Без екзогенна нуклеазна активност, без екзогенно замърсяване с ендо/екзонуклеаза.

     

    Техническа информация:

    1. Скоростта на амплификация на бързата ДНК полимераза е не по-малка от 1kb/10s.Различните PCR инструменти имат различни скорости на нагряване и охлаждане, режими на контрол на температурата и топлопроводимост, поради което оптимизирането на концентрацията на вашия праймер/сонда и метода на работа в комбинация с вашия специфичен бърз PCR инструмент е от съществено значение.

    2. Времето за обратна транскрипция се оптимизира според дължината на фрагмента, който трябва да се амплифицира.За по-дълги фрагменти времето за обратна транскрипция може да бъде подходящо удължено.

    3. Температурата на удължаване на отгряването трябва да бъде оптимизирана въз основа на стойността на Tm на праймерната сонда и действителните условия на реакцията.

    4. За праймери с по-ниска температура на отгряване или по-дълги от 200 bp фрагменти се препоръчва 3-стъпков метод.

    5. Моля, използвайте специални зони и пипети преди и след амплификация, носете ръкавици и ги сменяйте често;не отваряйте реакционната епруветка след приключване на PCR реакцията, за да сведете до минимум замърсяването на пробите от PCR продукти.

    6. Ефективността на използване на dUTP и чувствителността към UNG ензима се различават за различните целеви гени, така че ако използването на UNG система води до намаляване на чувствителността на откриване, реакционната система трябва да бъде коригирана и оптимизирана.Ако е необходима техническа поддръжка, моля свържете се с нас.

     

    Напишете вашето съобщение тук и ни го изпратете