M-MLV Neoscript обратна транскриптаза

Обратната транскриптаза на Neoscript е обратна транскриптаза, получена чрез мутационен скрининг на гена M-MLV от произход и експресия на вируса на миша левкемия Moloney в E.coli.Ензимът премахва активността на RNase H, има по-висока температурна толерантност и е подходящ за високотемпературна обратна транскрипция.Следователно, той е полезен за елиминиране на неблагоприятните ефекти на структурата на високо ниво на РНК и неспецифичните фактори върху синтеза на кДНК и има по-висока стабилност и способност за синтез на обратна транскрипция.Ензимът има по-висока стабилност и способност за синтез на обратна транскрипция.

Компоненти

1.200 U/μL Neoscript обратна транскриптаза

2.5 × буфер за първа нишка (по избор)

* 5 × First-Strand Buffer не съдържа dNTP, моля, добавете dNTP, когато подготвяте реакционната система

Препоръчително приложение

1.Едноетапна qRT-PCR.

2.Откриване на РНК вирус.

Условия на съхранение

-20°C за дългосрочно съхранение, трябва да се смеси добре преди употреба, избягвайте често замразяване-размразяване.

Определение на единица

Една единица включва 1 nmol dTTP за 10 минути при 37°C, използвайки поли(А)•олиго(dТ)₂₅като шаблон/грунд.

Контрол на качеството

1.SDS-PAGE електрофоретична чистота над 98%.

2.Чувствителност на усилване, контрол от партида до партида, стабилност.

3.Няма екзогенна нуклеазна активност, няма екзогенна ендонуклеаза или замърсяване с екзонуклеаза

Настройка на реакцията за първо решение за верижна реакция

1.Приготвяне на реакционната смес

Бележки:a/b: Моля, изберете различни типове праймери според вашите експериментални нужди.

2.Загрейте при 65°C за 5 минути и охладете бързо върху лед за 2 минути.

3.Добавете следните компоненти към горната система до общ обем от 20 µL и разбъркайте внимателно:

4. Моля, извършете реакцията според следните условия:

(1) Ако се използва Random Primer, реакцията трябва да се проведе при 25 ℃ за 10 минути и след това при 50 ℃ за 30 ~ 60 минути;

(2) Ако се използват Oligo dT или специфични праймери, реакцията трябва да се проведе при 50 ℃ за 30~60 минути.

5.Загрейте при 95 ℃ за 5 минути, за да инактивирате обратната транскриптаза на Neoscript и да прекратите реакцията.

6.Продуктите на обратната транскрипция могат да се използват директно в PCR реакция и флуоресцентна количествена PCR реакция или да се съхраняват при -20 ℃ за дълго време.

PCR Rдействие:

1.Приготвяне на реакционната смес

Бележки:a: Ако се добави твърде много разтвор за първа верижна реакция, PCR реакцията може да бъде инхибирана.

2.Процедура за PCR реакция

Бележки

1.Подходящ за оптимизиране на температурата на обратната транскрипция в диапазона от 42 ℃ ~ 55 ℃.

2.Има по-добра стабилност, подходящ е за високотемпературно усилване на обратната транскрипция.В допълнение, той е благоприятен за ефективно преминаване през сложни структурни области на РНК.Освен това, тое подходящ за едноетапно мултиплексно флуоресцентно количествено RT-PCR откриване.

3.Добра съвместимост с различни ензими за PCR амплификация и е подходящ за високочувствителни RT-PCR реакции.

4.Подходящ за високочувствителна едностепенна флуоресцентна количествена RT-PCR реакция, ефективно подобрява скоростта на откриване на ниска концентрация на шаблони.

5.Подходящ за изграждане на cDNA библиотека.