Warm Start Bst 2.0 ДНК полимераза (без глицерол)

Bst ДНК полимераза V2 е получена от Bacillus stearothermophilus ДНК полимераза I, която има 5′→3′ ДНК полимеразна активност и силна заместваща активност на веригата, но няма 5′→3′ екзонуклеазна активност.Bst DNA Polymerase V2 е идеално подходяща за изместване на вериги, изотермична амплификация LAMP (Loop mediated isothermal amplification) и бързо секвениране.Bst ДНК полимераза V2 е версия с горещ старт, базирана на Bst ДНК полимераза V2 (HC5005A), получена чрез технология за обратима модификация, която може да инхибира активността на ДНК полимеразата при стайна температура, така че реакционната система може да работи и да се формулира при стайна температура, за да се предотврати не -специфично усилване и подобряване на ефективността на реакцията и тази версия може да бъде лиофилизирана.В допълнение, неговата активност се освобождава при високи температури, така че няма нужда от отделна стъпка на активиране.

Компоненти

Bst ДНК полимераза V2 (без глицерол) (8U/μL)

Приложения

1.LAMP изотермично усилване

2.Реакция на единично изместване на ДНК верига

3.Високо GC генно секвениране

4.ДНК секвениране на нанограмно ниво.

Условия на съхранение

Транспортиране под 0°C и съхранение при -25°C~-15°C.

Определение на единица

Една единица се определя като количеството ензим, което включва 25 nmol dNTP в неразтворим в киселина материал за 30 минути при 65°C.

Контрол на качеството

1.Тест за чистота на протеин (SDS-PAGE):Чистотата на Bst ДНК полимераза V2 е ≥99%, определена чрез SDS-PAGE анализ с използване на детекция Coomassie Blue.

2.EндонуклеазаДейност:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1 μg λDNA в продължение на 16 часа при 37 ℃, не води до установено разграждане, както е определено.

3.Екзонуклеазна активност:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1 μg λ -Hind Ⅲ смляна ДНК в продължение на 16 часа при 37 ℃ не води до откриваемо разграждане, както е определено.

4.Дейност на Nickase:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1 μg pBR322 ДНК в продължение на 16 часа при 37°C не води до установено разграждане, както е определено.

5.РНКазна активност:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1,6 μg MS2 РНК в продължение на 16 часа при 37°C не води до установено разграждане, както е определено.

6.E. coliДНК:120 U от Bst ДНК полимераза V2 се изследват за наличие на геномна ДНК на E. coli, използвайки TaqMan qPCR с праймери, специфични за локуса на 16S rRNA на E. coli.Геномното ДНК замърсяване на E. coli е ≤1 копие.

Реакция на ЛАМПА

Бележки:

1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Според експерименталните нужди могат да се използват други багрила като заместители;

2) б.Основна смес: получена чрез смесване на 20 цМ FIP, 20 цМ BIP, 2,5 цМ F3, 2,5 цМ B3, 5 цМ LF, 5 цМ LB и други обеми.

Реакция и състояние

1 × HC Bst V2 буфер, температурата на инкубация е между 60°C и 65°C.

Топлинно инактивиране

 80°C, 20 минути