Bst 2.0 ДНК полимераза (без глицерол)
Bst ДНК полимераза V2 е получена от Bacillus stearothermophilus ДНК полимераза I, която има 5′→3′ ДНК полимеразна активност и силна заместваща активност на веригата, но няма 5′→3′ екзонуклеазна активност.Bst DNA Polymerase V2 е идеално подходяща за изместване на вериги, изотермична амплификация LAMP (Loop mediated isothermal amplification) и бързо секвениране.
Компоненти
| Компонент | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (без глицерол) (8U/μL) | 0,2 мл | 1 мл | 10 мл |
| 10×HC Bst V2 буфер | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 3×10 мл |
| MgSO4(100mM) | 1,5 мл | 2×1,5 мл | 2×10 мл |
Приложения
1. ЛАМПА изотермично усилване
2. Реакция на единично изместване на ДНК верига
3. Високо GC генно секвениране
4.ДНК секвениране на нанограмно ниво.
Условия на съхранение
Транспортиране под 0°C и съхранение при -25°C~-15°C.
Определение на единица
Една единица се определя като количеството ензим, което включва 25 nmol dNTP в неразтворим в киселина материал за 30 минути при 65°C.
Контрол на качеството
1.Тест за чистота на протеин (SDS-PAGE):Чистотата на Bst ДНК полимераза V2 е ≥99%, определена чрез SDS-PAGE анализ с използване на детекция Coomassie Blue.
2.Екзонуклеазна активност:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1 μg λ -Hind Ⅲ смляна ДНК в продължение на 16 часа при 37 ℃ не води до откриваемо разграждане, както е определено.
3.Дейност на Nickase:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1 μg pBR322 ДНК в продължение на 16 часа при 37°C не води до установено разграждане, както е определено.
4.РНКазна активност:Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 8 U Bst ДНК полимераза V2 с 1,6 μg MS2 РНК в продължение на 16 часа при 37°C не води до установено разграждане, както е определено.
5.Е. coli ДНК:120 U от Bst ДНК полимераза V2 се изследват за наличие на геномна ДНК на E. coli, използвайки TaqMan qPCR с праймери, специфични за локуса на 16S rRNA на E. coli.Геномното ДНК замърсяване на E. coli е ≤1 копие.
Реакция на ЛАМПА
| Компоненти | 25μL |
| 10×HC Bst V2 буфер | 2,5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μL |
| dNTPs (10mM всеки) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 зелен (25×)a | 1,0 μL |
| Грунд смесb | 6 μL |
| Bst ДНК полимераза V2 (без глицерол) (8 U/uL) | 1 μL |
| Шаблон | × μL |
| ddH2O | До 25 μL |
Бележки:
1) а.SYTOTM 16 Green (25×): Според експерименталните нужди могат да се използват други багрила като заместители;
2) б.Основна смес: получена чрез смесване на 20 цМ FIP, 20 цМ BIP, 2,5 цМ F3, 2,5 цМ B3, 5 цМ LF, 5 цМ LB и други обеми.
Реакция и състояние
1 × HC Bst V2 буфер, температурата на инкубация е между 60°C и 65°C.
Топлинно инактивиране
80 °C，20мин
