ДНКаза I (без Рназа) (5u/ul)
Каталожен номер: HC4007A
ДНКаза I (Дезоксирибонуклеаза I) е ендодезоксирибонуклеаза, която може да смила едно- или двуверижна ДНК.Той разпознава и разцепва фосфодиестерните връзки, за да произведе монодезоксинуклеотиди или едноверижни или двуверижни олигодезоксинуклеотиди с фосфатни групи в 5'-края и хидроксил в 3'-края.Активността на ДНКаза I зависи от Ca2+и може да се активира от двувалентни метални йони като Mn2+и Zn2+.5 mM Ca2+предпазва ензима от хидролиза.В присъствието на Mg2+, ензимът може произволно да разпознае и разцепи всяко място на всяка верига на ДНК.В присъствието на Мн2+, двойните вериги на ДНК могат да бъдат едновременно разпознати и разцепени на почти едно и също място, за да образуват плоски крайни ДНК фрагменти или лепкави крайни ДНК фрагменти с 1-2 стърчащи нуклеотида.
Компоненти
| Име | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, без RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1mL | 1mL | 5 × 1 ml | 5 × 10 мл |
Условия за съхранение
-25℃~-15℃ за съхранение;Транспортиране под пакети с лед.
Инструкции
1. Пригответе реакционния разтвор в епруветката без РНКаза в съответствие с пропорциите, посочени по-долу:
| Компонент | Сила на звука |
| РНК | X µg |
| 10 × DNase I буфер | 1μL |
| DNase I, без RNase (5U/μL) | 1 U на µg РНК① |
| ddH2O | До 10 μL |
Забележка: ①Изчислете обема на DNase I, който трябва да се добави въз основа на количеството РНК.
2. 37 ℃ за 15 минути;
3. Добавете 0,5 М EDTA до крайната концентрация от 2,5 mM~5 mM и загрейте при 65 ℃ за 10 минути, за да спрете реакцията.Пробата може директно да се използва за следващата реакция като обратна транскрипцияексперимент.
Определение на единица
Една единица се определя като количеството ензим, което напълно ще разгради 1 µg pBR322ДНК за 10 минути при 37 ℃.
Контрол на качеството
РНКаза:5U ДНКаза I с 1,6 µg MS2 РНК за 4 часа при 37 ℃ не води до разграждане катоопределя се чрез електрофореза в агарозен гел.
Бележки
1. Моля, пригответе 0,5 MEDTA сами.
2. Използвайте 1U DNase I на µg РНК.Въпреки това, ако РНК е по-малко от 1 µg, моля, използвайте 1U DNase I.
3. Моля, поставете ензима върху лед по време на работа.
