Superstart qPCR Premix plus-UNG

Каталожен номер: HCB5071E

Опаковка: 100RXN/1000RXN/10000RXN

Лиофилизиращ се

Модификация на антитела, 95 ℃, 1-5 минути горещ старт

Висока чувствителност и специфичност

Стабилно откриване при ниска концентрация, висока стойност на флуоресценция

Изпратете запитване

Описание на продукта

Подробности за продукта

Каталожен номер: HCB5071E

Superstart qPCR Premix plus-UNG е специализиран реагент, предназначен за PCR качествени и количествени реакции в реално време, използвайки откриване на базата на сонда, разработен специално за процеси на лиофилизация.Той съдържа нов ензим за горещ старт Hotstart Taq plus (DG), чиято ензимна активност Taq е затворена при стайна температура, като ефективно инхибира неспецифичното усилване, причинено от неспецифично отгряване на праймера или образуване на димер на праймера при ниски температурни условия, като по този начин подобрява спецификата на реакцията на усилване.Този реагент използва оптимизиран qPCR специфичен буфер и UNG/dUTP система против замърсяване за постигане на бързо горещо стартиране, което значително подобрява ефективността и чувствителността на qPCR реакциите.Той може да получи добри стандартни криви в широк диапазон от области на количествено определяне и точно да извърши количествено определяне, като ефективно предотвратява фалшиво положително усилване, причинено от остатъчни PCR продукти или аерозолно замърсяване.Този реагент е съвместим с повечето флуоресцентни количествени PCR инструменти от производители като Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad и Roche и др., и проявява добра стабилност в лиофилизирана форма.

Предишен: BsaI HCP1014A

Следващия: Протеиназа К (течна) HC4502A

Състав на реагента

1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg²⁺безплатно) (DG)

2. 250 mM MgCl₂

3. 4 × лиопротектор (по избор)

Условия за съхранение

Дългосрочно съхранение при -20 ℃;може да се съхранява при 4 ℃ до 3 месеца.Разбъркайте добре преди употреба иизбягвайте повторно замразяване и размразяване.

Протокол за колоездене

Процедура	темп.	време	Цикъл
Храносмилане	50 ℃	2 мин	1
Активиране на полимераза	95 ℃	1~5 мин	1
Денатуриране	95 ℃	10~20 сек	40-50
Отгряване и удължаване	56 ~ 64 ℃	20~60 сек	40-50

qPCR течна реакция SyПодготовка на стъблото

Състав	25µL обем	50µL обем	Крайна концентрация
5 × HotstartPremix плюс-UNG(Mg²⁺безплатно) (DG)	5µL	10µL	1×
250 mM MgCl₂	0,45 µL	0,9 µL	4,5 тМ
4×лиопротектор¹	6.25µL	12,5 µL	1×
25×Смес праймер-сонда²	1µL	2µL	1×
Шаблонна ДНК³	——	——	——
ddH₂O	До 25 µL	До 50 µL	——

1. Крайна концентрация от 0,2 μM за праймери обикновено дава добри резултати;когато ефективността на реакцията е лоша, коригирайте концентрацията на праймера в диапазона от 0,2-1 μM, ако е необходимо.Концентрацията на сондата обикновено се оптимизира в диапазона от 0,1-0,3 μM чрез градиентни експерименти, за да се намерят оптимални комбинации.

2. Броят на копията на целевите гени, съдържащи се в различните типове шаблони, варира;ако е необходимо, може да се извърши градиентно разреждане, за да се определи оптималното количество за добавяне на шаблон.

3. Тази система може да бъде лиофилизирана;когато клиентите използват тази система без изисквания за сушене чрез замразяване, може да се добави селективно 4 × лиопротектор; ако има необходими лиофилизирани продукти, по време на валидиране на ефективността на продукта на етап течни реагенти, трябва да се добави 4 × лиопротектор, за да се осигури съответствие с компонентите на лиофилизираната система и ефекти.

Когато системата се използваd за сушене чрез замразяване, пригответе система as следното:

Състав	25µL Реакционна система
5 × HotstartPremix плюс-UNG (Mg²⁺безплатно) (DG)	5µL
250 mM MgCl₂	0,45 µL
4×лиопротектор	6.25µL
25×Смес праймер-сонда	1µL
ddH₂O	До 18~20µL

* Ако са необходими други системи за сушене чрез замразяване, моля, консултирайте се отделно.

Процес на лиофилизацияss

Процедура	темп.	време	Състояние	налягане
Предварително замразяване	4 ℃	30 мин	Задръжте	1 атм
	-50 ℃	60 мин	Охлаждане
	-50 ℃	180 мин	Задръжте
Първично сушене	-30 ℃	60 мин	Отопление	Краен вакуум
Първично сушене	-30 ℃	70 мин	Задръжте	Краен вакуум
Вторично сушене	25 ℃	60 мин	Отопление	Краен вакуум
Вторично сушене	25 ℃	300 мин	Задръжте	Краен вакуум

1. Този процес на лиофилизация е процес на сушене чрез замразяване in situ за 25 µL реакционна система;аконеобходими са гранули за сушене чрез замразяване или други процеси на сушене чрез замразяване на място, моля, попитайте отделно.

2. Горният процес на лиофилизация е само за справка.Различните видове продукти и различните сублимационни сушилни имат различни параметри, така че могат да се правят корекции според действителнитеусловия по време на употреба.

3. Различни процеси на лиофилизация могат да бъдат подходящи за различни размери на партидите лиофилизиранпродукти, така че трябва да се извърши достатъчно валидиране на тестове, когато се използва за широкомащабно производство.

Инструкции за употреба на лиофилизаг прах

1. За кратко центрофугирайте лиофилизирания прах;

2. Добавете матрица нуклеинова киселина към лиофилизирания прах и добавете вода до 25 µL;

3. Разбъркайте добре чрез центрофугиране и пуснете на машина.

Контрол на качеството:

1. Функционално изследване: чувствителност, специфичност, възпроизводимост на qPCR.

2. Без екзогенна нуклеазна активност, без екзогенно замърсяване с ендо/екзонуклеаза.

Техническа информация:

1. Superstart qPCR Premix plus-UNG използва нов ензим за горещ старт, който позволява бързо горещ старт в рамките на 1~5 минути;чрез специална буферна формула е подходящ за мултиплексни флуоресцентни количествени PCR реакции.

2. Има по-висока специфичност, която значително подобрява чувствителността на флуоресцентното количествено PCR откриване на граници, правейки кривите на амплификация нормализирани, флуоресцентната стойност получава очевидно подобрение при шаблони с ниска концентрация, подходящи като високочувствителни флуоресцентни количествени PCR реагенти за откриване.

3. За праймери с по-ниска температура на отгряване или по-дълги от 200 bp фрагменти се препоръчва 3-стъпков метод.

4. Ефективността на използване на dUTP и чувствителността към UNG ензима се различават за различните целеви гени, така че ако използването на UNG система води до намаляване на чувствителността на откриване, реакционната система трябва да бъде коригирана и оптимизирана.Ако е необходима техническа поддръжка, моля свържете се с нашата компания.

5. Използвайте специални зони и пипети преди и след амплификация, носете ръкавици по време на работа и ги сменяйте често;не отваряйте реакционната епруветка след приключване на PCR, за да сведете до минимум замърсяването на пробите от PCR продукти.