ДНКаза I
ДНКаза I (Дезоксирибонуклеаза I) е ендодезоксирибонуклеаза, която може да смила едно- или двуверижна ДНК.Той разпознава и разцепва фосфодиестерните връзки, за да произведе монодезоксинуклеотиди или едно- или двуверижни олигодезоксинуклеотиди с фосфатни групи в 5'-края и хидроксил в 3'-края.Активността на DNase I зависи от Ca2+ и може да се активира от двувалентни метални йони като Mn2+ и Zn2+.5mM Ca2+ предпазва ензима от хидролиза.В присъствието на Mg2+ ензимът може произволно да разпознае и разцепи всяко място на всяка верига на ДНК.В присъствието на Mn2+, двойните вериги на ДНК могат да бъдат едновременно разпознати и разцепени на почти едно и също място, за да образуват плоски крайни ДНК фрагменти или лепкави крайни ДНК фрагменти с 1-2 изпъкнали нуклеотида.
Свойство на продукта
ДНК-аза I на говежди панкреас се експресира в експресионна система на дрожди и се пречиства.
Cкомпоненти
| Компонент | Сила на звука | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, без RNase | 20μL | 200μL | 1mL | 10 мл |
| 10×DNase I буфер | 1mL | 1mL | 5 × 1 мл | 5 × 10 мл |
Транспорт и съхранение
1. Стабилност при съхранение: – 15℃~-25℃ за съхранение;
2. Транспортна стабилност: Транспортиране под пакети с лед;
3. Доставя се в: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% глицерол, pH 7,6 при 25 ℃.
Определение на единица
Една единица се определя като количеството ензим, което ще разгради напълно 1 µg pBR322 ДНК за 10 минути при 37°C.
Контрол на качеството
РНКаза:5U от ДНКаза I с 1,6 μg MS2 РНК за 4 часа при 37 ℃ не води до разграждане, както е определено чрез електрофореза в агарозен гел.
бактериални Ендотоксин:LAL-тест, съгласно изданието на Китайската фармакопея IV 2020 г., метод за тестване на границата на гела, общо правило (1143).Съдържанието на бактериален ендотоксин трябва да бъде ≤10 EU/mg.
Инструкции за употреба
1. Пригответе реакционния разтвор в епруветката без РНКаза в съответствие с пропорциите, посочени по-долу:
| Компонент | Сила на звука |
| РНК | X μg |
| 10 × DNase I буфер | 1 μL |
| DNase I, без RNase (5U/μL) | 1 U на μg РНК |
| ddH2O | До 10 μL |
2,37 ℃ за 15 минути;
3. Добавете терминиращия буфер, за да спрете реакцията, и загрейте при 65 ℃ за 10 минути, за да инактивирате ДНКаза I. Пробата може да се използва директно за следващия експеримент за транскрипция.
Бележки
1. Използвайте 1U DNase I за μg РНК или 1U DNase I за по-малко от 1 μg РНК.
2.EDTA трябва да се добави до крайна концентрация от 5 mM, за да се предпази РНК от разграждане по време на ензимно инактивиране.
