Мултиплексен едноетапен RT-qPCR премикс
Описание
Каталожен номер: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix е мултиплексен количествен PCR комплект, базиран на РНК като шаблон.В експеримента обратната транскрипция и количествената PCR се извършват в една и съща реакционна епруветка, което опростява експерименталната операция и намалява риска от замърсяване.Уникалният дизайн на буфер и ензимна смес може да се използва в едноетапна лиофилизирана система.Комплектът използва устойчива на топлина обратна транскриптаза за ефикасен синтез на първата верига cDNA с помощта на hotstart Taq ДНК полимераза за количествена амплификация.Той съдържа оптимизиран реакционен буфер, смес от ензими и т.н., и бяха добавени фактори, които ефективно инхибират неспецифичната PCR амплификация и повишават ефективността на амплификацията на множество qPCR реакции, позволявайки количествена амплификация на множество флуоресценции, като същевременно се гарантира ефективността на амплификация на праймерите.
Компоненти
| Име |
| 1. Лио-буфер |
| 2. Лио-ензимен микс |
| 3. Лио протектор |
Транспортно състояниейон
О: Лио-буфер и защитно средство: -25~-15 ℃, срокът на годност е 1 година.
B: Лио-ензимен микс, 2-8 ℃, срок на годност 6 месеца.
Инструкция за работа
1. Реакционна система (вземете 25 μL като пример)
| Компоненти | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| Лио-буфер | 6 | 1* |
| Лио-ензимен микс | 1 | - |
| Лио-протектор | 8 | - |
| Праймерна смес (10 μM) | 1 | 0,1-1uM |
| Смес от сонди (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 uM |
| РНК шаблон | 5 | - |
| DEPC H2O | До 25 | - |
2. Оптимизиран цикличен протокол
1) Стандартен протокол за колоездене
| Етап на реакция | температура | време | Цикъл | |
| 1 | Обратна транскрипция | 50°Ca | 10 мин | 1 |
| 2 | Първоначална денатурация | 95°C | 5 минути | 1 |
| 3 | Реакция на усилване | 95°C | 15 сек | 45 цикъла |
| 60°Cb | 30 секc |
2) Протокол за бърз цикъл
|
| Етап на реакция | температура | време | Цикъл |
| 1 | Обратна транскрипция | 50°Ca | 2 мин | 1 |
| 2 | Първоначална денатурация | 95°C | 2 сек | 1 |
| 3 | Реакция на усилване | 95°C | 1 секунда |
45 цикъла |
| 60°Cb | 13 секc |
Забележка:
a) Обратен транскрипция: Температурата може да бъде 42°C или 50°C за 10-15 минути.
b) Реакция на усилване: Температурата се регулира според стойността на Tm на проектираните грундове.
° С)Флуоресценция сигнал придобиване: Моля, задайте експерименталната процедура в съответствие с изискванията наръководство за инструмент.
Техническа информация/спецификации
| Горещ старт | Вграден топъл старт |
| Метод за откриване | Откриване на праймер-сонда |
| PCR метод | Едноетапна RT-qPCR |
| Тип проба | РНК |
Бележки
1. Този продукт е само за изследователска употреба.
2. Моля, носете необходимото ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност!
