Рназа А
Рибонуклеаза A (RNaseA) е едноверижен полипептид, съдържащ 4 дисулфидни връзки с молекулно тегло около 13,7 kDa.РНКаза А е ендорибонуклеаза, която специфично разгражда едноверижна РНК при C и U остатъци.По-конкретно, разцепването разпознава фосфодиестерната връзка, образувана от 5'-рибозата на нуклеотида и фосфатната група на 3'-рибозата на съседния пиримидинов нуклеотид, така че 2,3'-цикличните фосфати се хидролизират до съответните 3 „нуклеозидни фосфати (напр. pG-pG-pC-pA-pG се разцепва от РНКаза А, за да се генерират pG-pG-pCp и A-PG).РНКаза А е най-активна при разцепването на едноверижна РНК.Препоръчителната работна концентрация е 1-100μG/mL, съвместима с различни реакционни системи.Ниска концентрация на сол (0-100 mM NaCl) може да се използва за разрязване на едноверижна РНК, двойноверижна РНК и РНК вериги, образувани от РНК-ДНК хибридизация.Въпреки това, при висока концентрация на сол (≥0,3 М), РНКаза А разцепва специфично само едноверижна РНК.
RNase A най-често се използва за отстраняване на RNA по време на приготвянето на плазмидна ДНК или геномна ДНК. Независимо дали DNase е активна или не по време на процеса на приготвяне, може лесно да повлияе на реакцията.Традиционният метод на кипене във водна баня може да се използва за инактивиране на ДНКазната активност.Този продукт не съдържа ДНКаза и протеаза и не изисква термична обработка преди употреба.В допълнение, този продукт може да се използва и в експерименти по молекулярна биология, като анализ на защита на РНКаза и анализ на последователност на РНК.
Условия за съхранение
Продуктът може да се съхранява при -25～-15℃, валиден 2 години.
Инструкции
Това е един от обичайните методи за приготвяне на разтвор за съхранение на RNase A.Може да се приготви и отдруги методи в съответствие с традиционните методи в лабораторията или справочната литература (като напрдиректно разтваряне в 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 или разтвор на Tris-NaCl)
1. Използвайте 10 mM натриев ацетат (рН 5,2), за да приготвите 10 mg/mL разтвор за съхранение на РНКаза А
2. Загряване при 100 ℃ за 15 минути
3. Охладете до стайна температура, добавете 1/10 обем от 1 М Tris-HCl (рН 7,4), регулирайте рН до 7,4 (занапример добавете 500 ml 10g/ml разтвор за съхранение на РНКаза 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Подопаковани при -20 ℃ за съхранение в замразено състояние, което може да бъде стабилно до 2 години.
[Бележки]: При кипене на разтвор на RNaseA при неутрални условия ще се образува утайка от RNase;Сварете го при по-ниско pH и ако има утаяване, може да се наблюдава, което може да се дължи на наличието на протеинови примеси.Ако се открие утайка след кипене, примесите могат да бъдат отстранени чрез високоскоростно центрофугиране (13000 об./мин.) и след това да се опаковат за съхранение в замразяване.
Информация за продукта
| Синоними | Рибонуклеаза I;Панкреатична рибонуклеаза;Рибонуклеаза 3'-пиримидноолигонуклеотидохидролаза;Рназа А;Ендорибонулцеаза I |
| CAS номер | 9001-99-4 |
| Външен вид | Бял лиофилизиран прах |
| Молекулно тегло | ~ 13.7kDa (аминокиселинна последователност) |
| Ph Стойност | 7,6 (диапазон на активност 6-10) |
| Подходяща температура | 60 ℃ (диапазон на активност 15-70 ℃) |
| Активиращ агент | Na2+.К+ |
| инхибитор | Рназа инхибитор |
| Метод на инактивиране | Не може да се инактивира чрез нагряване, препоръчва се да се използва центрофужна колона |
| Произход | Говежди |
| Разтворимост | Разтворим във вода (10 mg/ml) |
| Загуба на сухо | ≤5,0% |
| Ензимна активност | ≥60 Kunitz единици/mg |
| Изоелектрична точка | 9.6 |
Бележки
За вашата безопасност и здраве, моля, носете лабораторни престилки и ръкавици за еднократна употреба при работа.
