One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Каталожен номер: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) е базиран на сонда RT-qPCR комплект за бързо откриване, подходящ за едноплексна или мултиплексна количествена PCR, използваща РНК като шаблон (като РНК вирус).Този продукт използва ново поколение модифицирана с антитяло Taq ДНК полимераза и едноетапна специална обратна транскриптаза, с оптимизиран буфер за бързо усилване, което има по-бърза скорост на усилване, по-висока ефективност и специфичност на усилване.Той поддържа балансирано усилване както в единичен плекс, така и в мултиплекс на проби с ниска и висока концентрация за кратко време.
Компоненти
1. 5 × RT-qPCR буфер (U+)
2. Ензимен микс (U+)
Бележки:
а.5×RT-qPCR буфер (U+) включва dNTP и Mg2+;
b.Ензимен микс (U+) включва обратна транскриптаза, Hot Start Taq ДНК полимераза, RNase инхибитор и UDG;
° С.Използвайте накрайници без RNase, EP епруветки и др.
Преди употреба разбъркайте старателно буфера 5×RT-qPCR (U+).Ако има утаяване след размразяване, изчакайте буферът да се върне до стайна температура, разбъркайте и разтворете и след това ги използвайте нормално.
Условия за съхранение
Продуктът се доставя със сух лед и може да се съхранява при -25~-15 ℃ за 1 година.
Инструкции
1. Реакция Система
| Компоненти | Обем (20 μL реакция) |
| 2 × RT-qPCR буфер | 4μL |
| Ензимна смес (U+) | 0,8 μL |
| Буквар напред | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Обратно на грунд | 0,1 ~ 1,0 μM |
| Сонда TaqMan | 0.05~0.25μM |
| Шаблон | X μL |
| Вода без РНКаза | до 25 μL |
Бележки: Реакционният обем е 10-50 μL.
2. Протокол за колоездене (Sстандартен)
| Цикъл стъпка | темп. | време | Цикли |
| Обратна транскрипция | 55 ℃ | 10 мин | 1 |
| Първоначална денатурация | 95 ℃ | 30 сек | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10 сек | 45 |
| Отгряване/Удължаване | 60 ℃ | 30 сек |
| Протокол за колоездене (Бърз) Цикъл стъпка |
темп. |
време |
Цикли |
| Обратна транскрипция | 55 ℃ | 5 минути | 1 |
| Първоначална денатурация | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 3 сек | 43 |
| Отгряване/Удължаване | 60 ℃ | 10 s |
Бележки:
а.Температурата на обратната транскрипция е между 50 ℃ до 60 ℃, повишаването на температурата помага за усилване на сложни структури и шаблони с високо CG съдържание;
b.Оптималната температура на отгряване трябва да се регулира въз основа на стойността на Tm на праймера и да се избере най-краткото време за събиране на флуоресцентен сигнал въз основа на инструмента за PCR в реално време.
Бележки
Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност!
