5×Neoscript Fast RT-qPCR Премикс плюс-UNG

Каталожен номер: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) е високостабилна смес, базирана на сонда в една епруветка, подходяща за едноетапна обратна транскрипция и количествена PCR (qRT-PCR).Поддържа предварително смесване на праймери и сонди и остава стабилен след дълго съхранение при ниска температура.Пробата за тестване може да се добави директно при използване, без допълнително отваряне на епруветката/операция с пипетиране.Този продукт осигурява компоненти, напр. ДНК полимераза с горещ старт, M-MLV, термолабилна урацил ДНК гликозилаза (TS-UNG), РНКазен инхибитор, MgCl₂, dNTP (с dUTP вместо dTTP) и стабилизатори.С генетично модифицираната бърза амплификация обратна транскриптаза и ДНК полимераза е възможно PCR амплификацията да бъде завършена в рамките на 20-40 минути.Този реагент използва специален буфер за qPCR със смесени ензими от антиинхибиторен амплификационен ензим и UNG ензим.Следователно, той може да получи добра амплификация на целевите гени и да предотврати фалшива амплификация, причинена от остатъчно PCR и аерозолно замърсяване.Този реагент е съвместим с повечето флуоресцентни количествени PCR инструменти от производители като Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad и Roche.

Компонент

1.25×Neoscript Fast RTase/UNG микс

2.5×Neoscript Fast RT предварително смесен буфер (dUTP)

Условия за съхранение

Всички компоненти трябва да се съхраняват при -20 ℃ за дългосрочно съхранение и 4 ℃ до 3 месеца.Моля, разбъркайте добре след размразяване и центрофугирайте преди употреба.Избягвайте честото замразяване-размразяване.

Подготовка на qRT-PCR реакционна система

1) а. Крайната концентрация на праймера обикновено е 0,2 μM.За по-добри резултати концентрацията на праймера може да бъде оптимизирана в диапазона от 0,2-1 μM.Като цяло, концентрацията на сондата може да бъде оптимизирана в диапазона от 0,1-0,3 μM.

2) b. Когато се използва бърза PCR процедура, увеличаването на концентрацията на праймери и проби може да доведе до по-добри резултати от амплификация и съотношението им трябва да бъде съответно оптимизирано.

3) Различните видове проби съдържат различни типове и съдържание на инхибитор и брой копия на целевия ген.Обемът на пробата трябва да се разглежда според действителното състояние.Направете разреждане на пробата с вода без нуклеаза или TE буфер, ако е необходимо.

Реакция Cусловия

Контрол на качеството

1.Функционално откриване: чувствителност, специфичност и повторяемост на qPCR.

2.Няма екзогенна нуклеазна активност: няма екзогенна ендонуклеаза и замърсяване с екзонуклеаза.

Бележки

1.Скоростта на амплификация на бързата ДНК полимераза е не по-малка от 1kb/10s.Различните PCR инструменти имат различни скорости на нагряване и охлаждане, режими на контрол на температурата и топлопроводимост и по този начин оптимизирането на концентрацията на вашия праймер/сонда и метода на работа в комбинация с вашия специфичен бърз PCR инструмент е от съществено значение.

2.Този продукт има широка приложимост и е подходящ за високочувствителна молекулярна диагностика.Тристепенният PCR метод се препоръчва за праймери с ниска температура на отгряване или за амплификация на дълги фрагменти над 200 bp.

3.Тъй като различните ампликони имат различна ефективност на използване на dUTP и различна чувствителност към UNG, реагентите трябва да бъдат оптимизирани, ако чувствителността на откриване намалее при използване на UNG система.Моля, свържете се с нас за техническа поддръжка, ако е необходимо.

4.За да се избегне амплификация на остатъчните PCR продукти, за амплификация са необходими специална експериментална зона и пипета.Работете с ръкавици и ги сменяйте често и не отваряйте PCR епруветката след амплификация.