Robustart Taq ДНК полимераза

Robustart Taq DNA Polymerase е ДНК полимераза с горещ старт.Този продукт може не само да инхибира по-добре неспецифичната реакция, причинена от неспецифичното отгряване на праймери или агрегация на праймери в процеса на подготовка и амплификация на PCR система.Следователно, той има отлична специфичност и е по-ефективен за амплификация на шаблони с ниска концентрация и е подходящ за реакция на мултиплексирана PCR амплификация.Освен това този продукт има много добра приложимост и могат да се получат стабилни резултати от амплификация при различни видове PCR реакции.

Компоненти

1.5 U/μL Robustart Taq ДНК полимераза

2.10 × PCR буфер II (без Mg²+) (по избор)

3.25 mM MgCl₂(по избор)

* 10 × PCR буфер II (без Mg²+) не съдържа dNTP и Mg²+, моля, добавете dNTPs и MgCl₂при подготовката на реакционната система.

Препоръчани приложения

1.Бързо усилване.

2.Многократно усилване.

3.Директно усилване на кръв, тампони и други проби.

4.Откриване на респираторни заболявания.

Условия на съхранение

-20°C за дългосрочно съхранение, трябва да се смеси добре преди употреба, избягвайте често замразяване-размразяване.

*Ако се появи утаяване след охлаждане, това е нормално;препоръчва се да се уравновеси до стайна температура преди смесване и употреба.

Определение на единица

Една активна единица (U) се дефинира като количеството ензим, който включва 10 nmol дезоксирибонуклеотид в неразтворим в киселина материал при 74°C за 30 минути, използвайки активирана ДНК на сперматозоиди от сьомга като шаблон/праймер.

Контрол на качеството

1.SDS-PAGE електрофоретична чистота над 98%.

2.Чувствителност на усилване, контрол от партида до партида, стабилност.

3.Няма екзогенна нуклеазна активност, няма екзогенна ендонуклеаза или замърсяване с екзонуклеаза

Инструкции

Настройка на реакцията

Бележки:

1) а.Буферът не съдържа dNTP и Mg²+, моля, добавете dNTP и MgCl₂при подготовката на реакционната система.

2) б.Ако се използва за qPCR/qRT-PCR, към реакционната система трябва да се добавят флуоресцентни сонди.Обикновено крайна концентрация на праймер от 0,2 μM ще даде добри резултати;ако реакцията е лоша, концентрацията на праймера може да се регулира в диапазона от 0,2-1 μM.Концентрацията на сондата обикновено се оптимизира в диапазона от 0,1-0,3 μM.Могат да се извършат експерименти с градиент на концентрация, за да се намери най-добрата комбинация от праймер и сонда.

Протокол за термичен цикъл

Бележки

1.Скоростта на амплификация на бързата ДНК полимераза не трябва да бъде по-малка от 1 kb/10 s.Скоростта на повишаване и понижаване на температурата, режимът на контрол на температурата и ефективността на топлопроводимостта на различните PCR инструменти варират значително, така че се препоръчва да се оптимизират оптималните реакционни условия за конкретния бърз PCR инструмент.

2.Системата е много адаптивна, с по-висока специфичност и чувствителност.

3.Подходящи за използване като реагенти за откриване на PCR с висока чувствителност и могат да се използват в реакции на мултиплексна PCR амплификация.

4.5'→3' полимеразна активност, 5'→3' екзонуклеазна активност;няма 3'→5' екзонуклеазна активност;няма функция за корекция.

5.Подходящ за качествено и количествено изследване на PCR и RT-PCR.

6.3'-краят на PCR продукта е А, който може да бъде директно клониран в Т вектор.

7.Тристепенният метод се препоръчва за праймери с ниски температури на отгряване или за амплификация на фрагменти, по-дълги от 200 bp.