RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Този продукт съдържа реакционен буфер, RT-Enzymes Mix (Bst ДНК полимераза и топлоустойчива обратна транскриптаза), лиофилизирани защитни средства и хромогенни багрилни компоненти.За да използвате, просто използвайте буфер, реакционният ензим и праймерът се смесват и се добавят към шаблона;добавянето на лиофилизиран протектор може да бъде направо.Той беше свързан с лиофилизатор и лиофилизиран, като само праймерите и шаблоните бяха добавени, когато се използваха.Този комплект осигурява бързо, ясно визуално откриване на амплификация, като отрицателната реакция е обозначена в червено, а положителната реакция е обозначена с промяна в жълто.
Компонент
| Компонент | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-медииран буфер за усилване (с багрило) | 0,96 мл | 4,80 mL × 2 | 9,60 mL × 10 |
| RT-ензимна смес | 270 μL | 2,70 мл | 2,70 mL × 10 |
| Лиофилизиран протектор | 0,96 mL × 2 | 9,60 mL × 2 | 9,60 мл × 20 |
Приложения
За ДНК или РНК изотермична амплификация.
Условия за съхранение
Транспортиран със сух лед, съхраняван при -25 ~ -15 ℃.Избягвайте честото замразяване-размразяване, продуктът е валиден 12 месеца.
протокол
1.Размразете реакционния буфер, който ще използвате, при стайна температура.Разбъркайте за кратко или обърнете епруветките няколко пъти, за да се смесят напълно, след това центрофугирайте, за да съберете течността на дъното на епруветката.
2.Подготовка на реакционната система.Този реагент може да се приготви в две реакционни системи, течна реакционна смес и лиофилизирана системна смес.
1) Пригответе течна реакционна смес
| Компонент | Сила на звука |
| Loop-медииран буфер за усилване (с багрило) | 10 μL |
| RT-ензимна смес | 2,8 μL |
| 10 × Грунд смесa | 5 μL |
| Шаблони ДНК/РНК b | × μL |
| Вода без нуклеази | До 50 μL |
2) Лиофилизираща системна смес
① Пригответе лиофилизирана смес
| Компонент | Сила на звука |
| Loop-медииран буфер за усилване (с багрило) | 10 μL |
| Лиофилизиран протектор | 20 μL |
| RT-ензимна смес | 2,8 μL |
| Вода без нуклеази | До 50 μL |
② Лиофилизация: Приготвената смес се лиофилизира в система от 50 μL
③ Пригответе реакционна смес
| Компонент | Сила на звука |
| Лиофилизирана смес | 1 парче |
| 10 × Грунд смесa | 5 μL |
| Шаблони ДНК/РНК b | × μL |
| Вода без нуклеази | До 50 μL |
Бележки:
1) а.10 × праймер микс: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) б.DEPC (водоразтворим) се препоръчва за нуклеинова киселина templ.
1.Инкубирайте при 65°C за 30-45 минути, които могат да бъдат удължени по подходящ начин в зависимост от промяната на цвета. Времето за реакция.
2.Според невъоръжено око жълтото е положително, а червеното е отрицателно.
Бележки
1.В дъното на буферната епруветка може да се появи сол, разбъркайте за кратко или обърнете епруветките няколко пъти, за да се разбъркат добре при стайна температура.
2.Реакционната температура може да се оптимизира между 62 ℃ и 68 ℃ според състоянието на праймерите.
3.Опакованите реагенти не трябва да се излагат на въздух за дълго време.
4.Реакцията на червено и жълто обезцветяване зависи от промяната на рН на реакционната система, моля, не използвайте съдържащия Tris разтвор за съхранение на нуклеинова киселина, препоръчва се използването на ddH2O съхранена нуклеинова киселина;
5.Експериментът трябва да бъде стандартизиран, включително подготовката на реакционната система, лиофилизацията и процеса на обработка на пробата и добавяне на проба;
6.За да избегнете замърсяване, се препоръчва да подготвите реакционната система в ултрачиста пейка, в други Добавете шаблони към аспиратора на помещението, за да избегнете фалшиви положителни смущения.
