проу
Продукти
Т7 РНК полимераза HCP1011A Представено изображение
  • Т7 РНК полимераза HCP1011A

Т7 РНК полимераза


Каталожен номер:HCP1011A

Опаковка: 100μL/1mL/10mL/100mL

Т7 РНК полимераза е ДНК-зависима РНК полимераза от Т7 фаг

Описание на продукта

Данни за продукта

Т7 РНК полимераза е ДНК-зависима РНК полимераза от Т7 фаг, която притежава силна и специфична 5´→ 3´ РНК полимеразна активност. Т7 РНК полимераза има висока специфичност за Т7 промоторни последователности и ще синтезира големи количества РНК от ДНК фрагмент вмъкнат надолу по веригата от промотор.


  • Предишен:
  • Следващия:

  • Компоненти

    Т7 РНК полимераза (50 U/μL)

    10×HH T7 буфер

    Условия за съхранение

    Транспортиране под 0°C и съхранение при -25 ~ - 15°C.

    Спецификация

    Име на продукта

    Т7 РНК полимераза

    Характеристика на продукта

    Бистра течност

     

    Дефиниция на единица дейност

    Една единица се определя като количеството ензим

    който ще катализира NTP, за да произведе 1 nmol PPi в

    1 час при 37°С при стандартната реакционна система.

    Буфер за съхранение

    50 mM Tris-HCl, 100 mM NaCl, 20 mM β-M, 1 mM EDTA, 50% глицерол, 0.1% (w/v)

    Triton® X-100, pH 7,9 при 25°C.

     

    10×HH T7 буфер

    400 mM Tris-HCl (25 ℃, pH 8,20), 60 mM

    MgCl2, 100 mM DTT, 20 mM спермидин.

    Състояние на съхранение

    -25 ~ – 15 ℃, избягвайте многократно замразяване-размразяване

     

    Реакция и състояние

    Конвенционална реакция

    реагент

    Количество

    H2O без нуклеаза или вода, третирана с DEPC

    До 20 μL

    10×HH T7 буфер

    2 μL

    ATP/GTP/CTP/UTP (100 mM всеки)

    0,4 μL всеки (2 mMeach финал)

    Инхибитор на РНКаза (40 U/μL)(по избор)

    1 μL (40 U)

    Неорганична пирофосфатаза (по избор)

    0,5 μL (0,05U)

    Т7 РНК полимераза(50 U/μL)

    1 μL

    Линеаризиран ДНК шаблон

    1 μg

    Добавете реакционните компоненти в горния ред * 10 × HH T7 буферът е подходящ само за 2 mM NTP, други комплекти за транскрипция T7 с висок добив се препоръчват за 7,5 mM- 10 mM NTP.

    Време на инкубация:37 °C за 2 часа.

    Стоp на реакцията: Добавете 2 μL 0,2 M EDTA (рН 8,0 при 25 ℃) или загрейте до 75 °C за 10 минути.

    Отстраняване на ДНК: ДНК матрицата може да бъде отстранена с 2U DNase I (без RNase) и инкубиране за 15 минути при 37 °.

     

    Контрол на качеството

    Ендонуклеазна активност: Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 50U Т7 РНК-полимераза с 1 μg λDNA в продължение на 16 часа при 37 ℃, не води до забележимо разграждане, както е определено.

    Екзонуклеазна активност: Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 50 U Т7 РНК полимераза с 1 μg λ -Hind Ⅲ усвоена ДНК в продължение на 16 часа при 37 ℃ не води до откриваемо разграждане, както е определено.

    Nickase Дейност: Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 50 U Т7 РНК полимераза с 1 μg pBR322 ДНК в продължение на 16 часа при 37°C, не води до откриваемо разграждане, както е определено.

    РНКаза Дейност: Инкубирането на 50 μL реакция, съдържаща минимум 50 U Т7 РНК полимераза с 1,6 μg MS2 РНК в продължение на 16 часа при 37°C, не води до откриваемо разграждане, както е определено.

    Топлинно инактивиране: 75 °C за 10 минути.

     

    Предпазна мярка

    • Реакцията на транскрипция трябва да се извърши в среда без замърсяване с РНКаза.Препоръчително е да носите ръкавици.Накрайниците, тръбите и водата не трябва да съдържат нуклеази.

    • Производственият добив на РНК може да бъде подобрен чрез увеличаване на концентрацията на NTP (всяка концентрация може да достигне 10mM), докато концентрацията на Mg2+ трябва да бъде увеличена по подходящ начин.

    • Реакционната смес за синтез на РНК трябва да се приготви при стайна температура, тъй като ДНК може да се утаи в присъствието на 10 × HH T7 буфер при 4°C.

    • Добивът на транскрипти с подходяща дължина намалява, ако шаблонната ДНК е непълно линеаризирана.• Реакционната смес може да бъде увеличена или намалена.• Ако добивът на реакционния продукт е намален, към реакционната система може да се добави 20 mM пресен DTT.

    • Транскрибираните фрагменти са по-малки или равни на 500 bp и се препоръчва времето за транскрипция да се удължи до 4-8 часа.

    • Лесно се откриват утайки в 10×HH T7.

    Напишете вашето съобщение тук и ни го изпратете