проу
Продукти
Протеиназа K NGS (прах) HC4507A Показано изображение
  • Протеиназа K NGS (прах) HC4507A
  • Протеиназа K NGS (прах) HC4507A

Протеиназа K NGS (прах)


Каталожен номер: HC4507A

Опаковка: 1g/10g/100g/500g

 Без DNase, RNase, Nickase

Активност: ≥40 U/mg

Остатък от нуклеинова киселина: ≤ 5 pg/mg

Биологично натоварване: ≤ 50 CFU/g

Срок на годност 3 години

Транспортиране при стайна температура

Капацитет на една партида 30 кг

 

Описание на продукта

Подробности за продукта

Данни

Каталожен номер: HC4507A

NGS протеаза K е стабилна серинова протеаза с висока ензимна активност и широка субстратна специфичност. Ензимът преференциално разлага естерни връзки и пептидни връзки в съседство с С-края на хидрофобни аминокиселини, сяросъдържащи аминокиселини и ароматни аминокиселини.Така че често се използва за разграждане на протеини в къси пептиди.NGS протеаза K е типична серинова протеаза с Asp39-Неговата69-сер224каталитична триада, която е уникална за сериновите протеази, а каталитичният център е заобиколен от Ca2+свързващи места за стабилизиране, поддържане на висока ензимна активност при по-широк диапазон от условия.


  • Предишен:
  • Следващия:

  • Спецификация

    Външен вид

    Бял до почти бял аморфен прах, лиофилизиран

    Специфична дейност

    ≥40U/mg твърдо вещество

    ДНКаза

    Няма открити

    РНКаза

    Няма открити

    Биотовар

    ≤50CFU/g твърдо вещество

    Остатък от нуклеинова киселина

    <5 pg/mg твърдо вещество

     

    Имоти

    Източник

    Tritirachium албум

    EC номер

    3.4.21.64(Рекомбинант от Tritirachium album)

    Молекулно тегло

    29 kDa (SDS-PAGE)

    Изоелектрична точка

    7.81 Фиг.1

    Оптимално pH

    7,0-12,0 (Всички имат висока активност) Фиг.2

    Оптимална температура

    65℃ Фиг.3

    pH стабилност

    pH 4,5-12,5 (25℃, 16h) Фиг.4

    Термична стабилност

    Под 50 ℃ (pH 8,0, 30 минути) Фиг.5

    Стабилност при съхранение

    Съхранява се при 25 ℃ в продължение на 12 месеца Фиг.6

    Активатори

    SDS, урея

    инхибитори

    Диизопропил флуорофосфат;бензилсулфонил флуорид

     

    Условия за съхранение

    Съхранявайте лиофилизирания прах при -25~-15 ℃ за дълго време далеч от светлина;След разтваряне разпределете аликвотна част в подходящ обем за краткосрочно съхранение при 2-8 ℃ далеч от светлина или дългосрочно съхранение при -25~-15 ℃ далеч от светлина.

     

    Предпазни мерки

    Носете защитни ръкавици и очила, когато използвате или претегляте, и дръжте добре проветрен след употреба.Този продукт може да причини кожна алергична реакция и сериозно дразнене на очите.При вдишване може да причини симптоми на алергия или астма или диспнея.Може да причини дразнене на дихателните пътища.

     

    Дефиниция на единица

    Една единица NGS протеаза K се определя като количеството ензим, необходимо за хидролизиране на казеина в 1 μmol L-тирозин при стандартни условия на определяне.

     

     Приготвяне на реактиви

    реагент

    производител

    Каталог

    Казеин техническиот краве мляко

    Сигма Олдрич

    C7078

    NaOH

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    10019762

    NaH2PO4·2H2O

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    20040718

    Na2HPO4

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    20040618

    Трихлороцетна киселина

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    80132618

    Натриев ацетат

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    10018818

    Оцетна киселина

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    10000218

    НС1

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    10011018

    Натриев карбонат

    Sinopharm ChemicalReagent Co., Ltd.

    10019260

    Фолин-фенол

    Sangon Biotech (Шанхай)ООД.

    A500467-0100

    L-тирозин

    Сигма

    93829

    Реактив I:

    Субстрат: 1% казеин от разтвор на говеждо мляко: разтворете 1 g казеин от говеждо мляко в 50 ml 0,1 М разтвор на натриев фосфат, рН 8,0, загрейте във водна баня при 65-70 °C за 15 минути, разбъркайте и разтворете, охладете с вода, коригирана с натриев хидроксид до pH 8,0 и се разрежда до 100 ml.

    Реагент II:

    Разтвор на TCA: 0.1M трихлороцетна киселина, 0.2M натриев ацетат и 0.3M оцетна киселина (претеглят се последователно 1.64g трихлороцетна киселина + 1.64g натриев ацетат + 1.724mL оцетна киселина, добавят се 50mL дейонизирана вода, регулира се с HCl до pH 4.03 и се разрежда в 100 мл).

    Реактив III:

    0,4 ml разтвор на натриев карбонат (претеглят се 4,24 g безводен натриев карбонат и се разтварят в 100 ml вода)

    Реактив IV:

    Фолинов фенолен реагент: разредете 5 пъти с дейонизирана вода.

    Реактив V:

    Ензимен разредител: 0,1 М разтвор на натриев фосфат, рН 8,0.

    Реактив VI:

    Стандартен разтвор на L-тирозин: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml L-тирозин, разтворен с 0,2 М НС1.

     

    Процедура

    1. Включете UV-Vis спектрофотометъра и изберете фотометрично измерване.

    2. Задайте дължината на вълната като 660nm.

    3. Включете водната баня, задайте температурата на 37 ℃, уверете се, че температурата не се променя за 3-5 минути.

    4. Загрейте предварително 0,5 ml субстрат в 2 ml центрофужна епруветка при 37 ℃ водна баня за 10 минути.

    5. Екстрахирайте 0,5 ml разреден ензимен разтвор в предварително загрятата центрофужна епруветка за 10 минути.Задайте ензимен разредител като празна група.

    6. Добавете 1,0 mL TCA реагент веднага след реакцията.Разбъркайте добре и инкубирайте във водна баня за 30 минути.

    7. Центрофугирайте реакционния разтвор.

    8. Добавете следните компоненти в посочения ред.

    реагент

    Сила на звука

    Супернатант

    0,5 мл

    0.4M натриев карбонат

    2,5 мл

    Фолинов фенолен реактив

    0,5 мл

    9. Разбъркайте добре, преди да инкубирате във водна баня при 37 ℃ за 30 минути.

    10. OD660е определена като ОД1;празна контролна група: Ензимен разредител се използва за заместване на ензимния разтвор за определяне на OD660като OD2, ΔOD=OD1-OD2.

    11. Стандартна крива на L-тирозин: 0,5 mL разтвор на L-тирозин с различна концентрация, 2,5 mL 0,4 M натриев карбонат, 0,5 mL фолинов фенолен реагент в 5 mL центрофужна епруветка, инкубирайте при 37 ℃ за 30 минути, детектирайте за OD660за различна концентрация на L-тирозин, след което се получава стандартната крива Y=kX+b, където Y е концентрацията на L-тирозин, X е OD600.

     

    Изчисляване

     

    2: Общ обем на реакционния разтвор (mL)

    0,5: Обем на ензимния разтвор (mL)

    0,5: Обем на реакционната течност, използван при хромогенно определяне (mL)

    10: Време за реакция (мин)

    Df: Многократно разреждане

    C: Ензимна концентрация (mg/mL)

    Фигури

     

    Фиг.1 ДНК остатък

    проба

    Ave C4

    Нуклеинова киселина

    Възстановяване (pg/mg)

    Възстановяване (%)

    Общ нуклеинов

    киселина ( pg/mg)

    PRK

    24,66

    2.23

    83%

    2,687

    PRK+STD2

    18,723

    126,728

    STD1

    12,955

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    STD2

    16

    STD3

    19.125

    STD4

    23.135

    STD5

    26,625

    H2O без РНК

    Неопределен

     

    Фиг.2 Оптимално pH

     

    Фиг.3 Оптимална температура

     

    Фиг.4 pH стабилност

     

    Фиг.5 Термична стабилност

     

    Фиг.6 Стабилност при съхранение при 25 ℃