Температурно чувствителен UNG
Чувствителен към температура UNG (TS-UNG) е получен чрез рекомбинантна експресия в E. coli.Ензимът катализира освобождаването на свободен урацил от урацил-съдържаща едно- и двуверижна ДНК и е неактивен срещу РНК.В сравнение с конвенционалния UNG ензим от генен произход на E. coli, TS-UNG ензимът има по-висока активност при ниски температури (20 ℃ ~ 37 ℃) и е температурно чувствителен и лесно се инактивира (50 ℃), избягвайки разграждането на dUTP-съдържащата амплификация продукти при стайна температура от остатъчната активност, която може да остане след инактивиране на конвенционалния UNG ензим.Следователно ензимът TS-UNG е не само подходящ за реакция за предотвратяване на замърсяване с PCR, но също така съвпада добре с програмата за амплификация на RT-PCR и може да се използва в реакция за предотвратяване на замърсяване с RT-PCR.
Препоръчително приложение
Предотвратяване на замърсяване Усилване
Условия на съхранение
-20°C за дългосрочно съхранение, трябва да се смеси добре преди употреба, избягвайте често замразяване-размразяване.
Буфер за съхранение
20 mM Tris-HCl (рН 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, стабилизатор, 50% глицерол.
Определение на единица
Количеството ензим, необходимо за разграждане на 1 µg едноверижна ДНК, съдържаща dU бази за 1 час при 37°C, е 1 единица активност (U).
Контрол на качеството
1.SDS-PAGE електрофоретична чистота над 98%
2.Активност на разграждане, контрол от партида до партида, стабилност
3.Няма екзогенна нуклеазна активност, няма екзогенна ендонуклеаза или замърсяване с екзонуклеаза.
Инструкции
| Компоненти | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| 10 × PCR буфер (без dNTP, Mg²+Безплатно) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (заместете dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 тМ |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Грунд смеса | 2 | 1× |
| Шаблон | - | <1μg/реакция |
| ddH2O | До 50 | - |
Забележка: a: Ако се използва за qPCR/qRT-PCR, флуоресцентната сонда трябва да се добави към реакционната система.Обикновено крайна концентрация на праймер от 0,2 μM може да даде добри резултати;когато ефективността на реакцията е лоша, концентрацията на праймера може да се регулира в диапазона от 0,2-1 μM.Обикновено концентрацията на сондата се оптимизира в диапазона от 0,1-0,3 μM.Могат да се извършат експерименти с градиент на концентрация, за да се намери най-добрата комбинация от праймер и сонда.
Бележки
1.Оптималната реакционна температура на ензима TS-UNG е относително ниска и може да бъде оптимизирана в диапазона от 20 ℃ ~ 37 ℃, дозировката на ензима и времето за реакция могат да бъдат оптимизирани в диапазона от 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 минути;и ензимът може да бъде инактивиран в процеса на обратна транскрипция.
2.Подходящ е за PCR и RT-PCR за предотвратяване на замърсяване.
3.Избягвайте честото замразяване-размразяване и не излагайте на големи температурни колебания.
4.Различните гени, които трябва да бъдат амплифицирани, имат различна ефективност на използване на dUTP и чувствителност към UNG ензима, следователно, ако използването на UNG система води до намаляване на чувствителността на откриване, реакционната система трябва да бъде коригирана и оптимизирана, ако имате нужда от техническа поддръжка, моля, свържете се нашата компания.
