Ултра Нуклеаза
UltraNuclease е генетично инженерна дендонуклеаза, получена от Serratia marcescens, която е способна да разгражда ДНК или РНК, или двуверижни, или едноверижни, линейни или кръгови, при широк диапазон на условия, напълно разгражда нуклеинови киселини в 5'-монофосфатни олигонуклеотиди с дължина 3-5 бази .След модификация на генното инженерство, продуктът е ферментирал, експресиран и пречистен в Escherichia coli (E. coli), което намалява вискозитета на клетъчния супернатант и клетъчния лизат в научните изследвания, но също така подобрява ефективността на пречистване и функционалните изследвания на протеина.Може също да се използва в генната терапия, пречистването на вируси, производството на ваксини, фармацевтичната индустрия на протеини и полизахариди като реагент за отстраняване на остатък от нуклеинова киселина.
Характеристики на продукта
| CAS номер | 9025-65-4 |
| EC No. | |
| Молекулно тегло | 30kDa |
| Изоелектрична точка | 6,85 |
| Чистота на протеина | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Конкретна дейност | ≥1.1 × 106 U/mg |
| Оптимална температура | 37°C |
| Оптимално pH | 8.0 |
| Протеазна активност | отрицателен |
| Биотовар | <10CFU/100 000U |
| Остатъчен протеин на клетката гостоприемник | ≤10ppm |
| Хеви метъл | ≤10ppm |
| Бактериален ендотоксин | <0,25EU/1000U |
| Буфер за съхранение | 20mM Tris-HCl, pH 8.0, 2mM MgCl2, 20mM NaCl, 50% глицерол |
Условия за съхранение
≤0°C транспортиране；-25~-15°C Съхранение，2 години валидност (избягвайте замразяване-размразяване).
Определение на единица
Количеството ензим, използвано за промяна на стойността на абсорбция на △A260 с 1,0 в рамките на 30 минути при 37 °C, рН 8,0, еквивалентно на смляна 37μg ДНК на сперматозоиди от сьомга чрез нарязване на олигонуклеотиди, беше определено като активна единица (U).
Контрол на качеството
Остатъчен протеин на клетката гостоприемник: ELISA комплект
•Протеаза остатъци: 250 KU/mL UltraNuclease реагира със субстрата за 60 минути, не е открита никаква активност.
•Бактериален ендотоксин: LAL-тест, Фармакопея на Китайската народна република, том 4 (издание 2020 г.), метод за тестване на границата на гела.Общи правила (1143).
•Биологично натоварване: Фармакопея на Китайската народна република, том 4 (издание 2020 г.)— Общо
Правила за тест за стерилност (1101), Национален стандарт на КНР, GB 4789.2-2016.
•Хеви метъл:ICP-AES, HJ776-2015.
Операция
UltraNuclease активността беше значително инхибирана, когато концентрацията на SDS беше над 0,1% или EDTA
концентрацията е над 1 mM. Повърхностно активното вещество Triton X-100, Tween 20 и Tween 80 няма ефект върху нуклеазата
свойства, когато концентрацията е под 1,5%.
| Операция | Оптимална работа | Валидна операция |
| температура | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2mM | 1-15mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-меркаптоетанол | 0-100mM | >100mM |
| Едновалентен метален йон （Na+, K+ и др.） | 0-20mM | 0-200mM |
| PO43- | 0-10mM | 0-100mM |
Употреба и дозировка
• Премахнете екзогенната нуклеинова киселина от продуктите на ваксината, намалете риска от остатъчна токсичност на нуклеинова киселина и подобрете безопасността на продукта.
• Намаляване на вискозитета на фуражната течност, причинен от нуклеинова киселина, съкращаване на времето за обработка и увеличаване на добива на протеин.
• Отстранете нуклеиновата киселина, която е обвила частицата (вирус, тяло на включване и т.н.), което е благоприятно
до освобождаването и пречистването на частицата.
| Експериментален тип | Производство на протеини | Вирус, ваксина | Клетъчни лекарства |
| Брой клетки | 1 g мокро тегло на клетката (ресуспендиран с 10 ml буфер) | 1л ферментация течен супернатант | 1L култура |
| Минимална доза | 250U | 100U | 100U |
| Препоръчителна дозировка | 2500U | 25000U | 5000U |
• Третирането с нуклеаза може да подобри разделителната способност и възстановяването на пробата за колонна хроматография, електрофореза и блот анализ.
• При генната терапия нуклеиновата киселина се отстранява, за да се получат пречистени адено-асоциирани вируси.
