Рназа инхибитор (без глицерол)
Миши RNase инхибитор е рекомбинантен миши RNase инхибитор, експресиран и пречистен от E.coli.Той се свързва с РНКаза A, B или C в съотношение 1:1 чрез нековалентно свързване, като по този начин инхибира активността на трите ензима и предпазва РНК от разграждане.Той обаче не е ефективен срещу РНКаза 1, РНКаза Т1, S1 нуклеаза, РНКаза Н или РНКаза от Aspergillus.Инхибиторът на миша РНКаза беше тестван чрез RT-PCR, RT-qPCR и IVT иРНК и беше съвместим с различни търговски обратни транскриптази, ДНК полимерази и РНК полимерази.
В сравнение с инхибиторите на човешката РНКаза, инхибиторът на мишата РНКаза не съдържа два цистеина, които са силно чувствителни към окисление, което причинява инактивиране на инхибитора.Това го прави стабилен при ниски концентрации на DTT (по-малко от 1 mM).Тази характеристика го прави подходящ за използване при реакции, при които високите концентрации на DTT са неблагоприятни за реакцията (напр. RT-PCR в реално време).
Aприложение
Този продукт може да се използва широко във всеки експеримент, при който е възможна интерференция с РНКаза, за да се избегне разграждането на РНК, като например:
1. Синтез на кДНК на първа верига, RT-PCR, RT-qPCR и др.;
2. Защита на РНК от разграждане при in-vitro транскрипция/транслация (напр. вирусна репликация in vitro);
3. Инхибиране на активността на РНКаза по време на изолиране и пречистване на РНК.
Условия за съхранение
Съхранявайте при -25～-15℃;
Цикли на замразяване-размразяване ≤ 5 пъти;
Валиден за 1 година.
Дефиниция на единица
Една единица се определя като количеството РНКазен инхибитор, необходим за инхибиране на активността на 5 ng РНКаза А с 50%.
Молекулно тегло
РНКазен инхибитор (без глицерол) е 50 kDa протеин.
Контрол на качеството
Екзонуклеаза Дейност:
Инкубирането на 40 U ензим с 1 μg λ-Hind III усвоена ДНК в продължение на 16 часа при 37°C не доведе до откриваемо разграждане на ДНК, както е определено чрез гел електрофореза.
Ендонуклеазна активност:
Инкубирането на 40 U ензим с 1 μg λ ДНК в продължение на 16 часа при 37°C не доведе до откриваемо разграждане на ДНК, както е определено чрез гел електрофореза.
Нарязване Дейност:
Инкубирането на 40 U ензим с 1 μg pBR322 в продължение на 16 часа при 37 °C не доведе до откриваемо разграждане на ДНК, както е определено чрез гел електрофореза.
РНКаза Дейност:
Инкубирането на 40 U ензим с 1,6 μg MS2 РНК в продължение на 4 часа при 37 °C не доведе до откриваемо разграждане на РНК, както е определено чрез гел електрофореза.
E.coli ДНК:
40 U ензим се откриват от TaqMan qPCR.ДНК на E.coli е ≤ 0,1 pg/40U.
Nбележкаs
1. Не разклащайте и не разбърквайте силно, за да предотвратите инактивирането на ензима.
2. Инхибиторът на РНКаза е активен при температури, вариращи от 25 ℃ до 55 ℃ и се инактивира при ≥65 ℃.
3. Активността на RNase H, RNase 1 и RNase T1 не се инхибира.
4. Диапазонът на рН за инхибиране на активността на РНКазата е широк (активен при рН 5-9), проявяващ максимална активност при рН 7-8.
