CHO HCP ELISA комплект

В този анализ се използва едноетапен имуносорбентен ELISA метод.Проби, съдържащи CHOK1 HCP, реагират едновременно с HRP-белязано козе анти-CHOK1 антитяло и анти-CHOK1 антитяло, покрити върху ELISA плака, като накрая образуват сандвич комплекс от твърдофазно антитяло-HCP-белязано антитяло.Несвързаният антиген-антитяло може да бъде отстранен чрез измиване на ELISA плаката.TMB субстратът се добавя към ямката за достатъчна реакция.Развитието на цвета се спира след добавяне на стоп разтвора и стойността на ОП или абсорбцията на реакционния разтвор при 450/650 nm се отчита с четец на микроплаки.Стойността на ОП или стойността на абсорбция е пропорционална на съдържанието на HCP в разтвора.От това концентрацията на HCP в разтвора може да се изчисли съгласно стандартната крива.

Приложение

Този комплект се използва за количествено откриване на съдържанието на протеинови остатъци от клетка гостоприемник CHOK1 в пробите.

Cкомпоненти

Изисква се оборудване

Съхранение и стабилност

1.Транспорт при -25~-15°C.

2.Условията на съхранение са както е показано в таблица 1;компоненти 1-2 се съхраняват при ≤–20°C, 5-6 се съхраняват при стайна температура, 3、4、7、8 се съхраняват при 2-8 ℃;срокът на валидност е 12 месеца.

Параметри на продукта

1.Чувствителност: 1ng/mL

2.Диапазон на откриване: 3- 100 ng/mL

3.Прецизност: CV в рамките на анализа ≤ 10%, CV между анализите ≤ 15%

4.HCP покритие: >80%

5.Специфичност: Този комплект е универсален, тъй като реагира специфично с CHOK1 HCP, независимо от процеса на пречистване.

Подготовка на реагента

1.PBST 0,05%

Вземете 15 ml 20 × PBST 0,05%, разреден в ddH₂O, и се допълва до 300 ml.

2.1,0% BSA

Вземете 1g BSA от бутилката и разредете в 100 ml PBST 0,05%, разбъркайте добре, докато се разтвори напълно, и съхранявайте при 2-8°C.Приготвеният буфер за разреждане е валиден 7 дни.Препоръчва се да се приготвят според нуждите.

3.Разтвор за откриване 2μg/mL

Вземете 48 μL от 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP и разредете в 11,952 μL 1% BSA, за да получите крайна концентрация от 2 μg/mL разтвор за откриване.

4.QC и подготовка на CHOK1 HCP стандарти

Таблица: Подготовка на QC и стандарти 

Процедура за анализ

1.Пригответе реагентите, както е посочено в „Приготвяне на реагент“ по-горе.

2.Вземете 50 μL стандарти, проби и QC (вижте таблица 3) във всяка ямка, след което добавете 100 μL разтвор за откриване (2 μg/mL);Покрийте плочата с уплътнител и поставете ELISA плочата върху термомиксера.Инкубирайте при 500rpm, 25±3℃ за 2 часа.

3.Обърнете микроплаката в мивката и изхвърлете покриващия разтвор.Пипетирайте 300 μL PBST 0,05% във всяка ямка, за да измиете плаката ELISA и изхвърлете разтвора, и повторете промиването 3 пъти.Обърнете чинията върху чиста хартиена кърпа и я подсушете.

4.Добавете 100 μL ТМВ субстрат (вижте таблица 1) към всяка ямка, запечатайте ELISA плаката и инкубирайте на тъмно при 25±3℃ за 15 минути.

5.Пипетирайте 100 μL стоп разтвор във всяка ямка.

6.Измерете абсорбцията при дължина на вълната 450/650 nm с четец за микроплаки.

7.Анализирайте данни от SoftMax или еквивалентен софтуер.Начертайте стандартна крива с помощта на четирипараметърен логистичен регресионен модел.

Пример за стандартна крива

ЗАБЕЛЕЖКА: Ако концентрацията на HCP в пробата надвишава горната граница на стандартната крива, тя трябва да бъде правилно разредена с буфер за разреждане преди тестване.

ЗАБЕЛЕЖКИ

Разтворът за спиране е 2M сярна киселина, моля, работете внимателно, за да избегнете пръски!