Комплект за генотипиране на мишка

Каталожен номер: HCR2021A

Този продукт е комплект, предназначен за бърза идентификация на генотипове на мишки, включително сурова екстракция на ДНК и система за PCR амплификация.Продуктът може да се използва за PCR амплификация директно от миша опашка, ухо, пръст на крака и други тъкани след просто разцепване с лизисен буфер и протеиназа k.Без смилане за една нощ, екстракция с фенол-хлороформ или колонно пречистване, което е просто и съкращава времето, отнемащо експериментите.Продуктът е подходящ за амплификация на целеви фрагменти до 2kb и мултиплексни PCR реакции с до 3 двойки праймери.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix съдържа генетично модифицирана ДНК полимераза, Mg²⁺, dNTPs и оптимизирана буферна система за осигуряване на висока ефективност на амплификация и толерантност към инхибитори, така че PCR реакциите да могат да се извършват чрез добавяне на шаблон и праймери и рехидратиране на продукта до 1×.PCR продуктът, амплифициран с този продукт, има изпъкнала "А" база в 3' края и може да се използва директно за TA клониране след пречистване.

Компоненти

Условия за съхранение

Продуктите трябва да се съхраняват при -25 ~ -15 ℃ в продължение на 2 години.След размразяване, Lysis Buffer може да се съхранява при 2~8 ℃ за краткосрочна многократна употреба и да се разбърква добре, когато се използва.

Приложение

Този продукт е подходящ за нокаут анализ на мишка, трансгенно откриване, генотипиране и т.н.

Характеристика

1.Лесна работа: няма нужда да се извлича геномна ДНК;

2.Широко приложение: подходящ за директно усилване на различни миши тъкани.

Инструкции

1.Освобождаване на геномна ДНК

1) Получаване на лизат

Тъканният лизат се приготвя според броя на пробите от мишки за лизиране (тъканният лизат трябва да се приготви на място в съответствие с дозировката и да се смеси старателно за употреба), а съотношението на реагентите, необходими за една проба, е както следва:

2) Подготовка на пробата и лизис

Препоръчителна употреба за тъкани

Вземете подходящо количество проби от миши тъкани в чисти центрофужни епруветки, добавете 200 μL пресен тъканен лизат към всяка центрофужна епруветка, завихрете и разклатете, след това инкубирайте при 55 ℃ за 30 минути и след това загрейте при 98 ℃ за 3 минути.

3) Центрофугиране

Разклатете добре лизата и центрофугирайте при 12 000 rpm за 5 минути.Супернатантата може да се използва като шаблон за PCR амплификация.Ако шаблонът е необходим за съхранение, прехвърлете супернатантата в друга стерилна центрофужна епруветка и я съхранявайте при -20 ℃ за 2 седмици.

2.PCR амплификация

Отстранете сместа 2×Mouse Tissue Direct PCR от -20℃ и размразете върху лед, разбъркайте с главата надолу и подгответе PCR реакционната система съгласно следната таблица (работете върху лед):

Забележка:

a) Добавеното количество не трябва да надвишава 1/10 от системата и ако се добави твърде много, PCR амплификацията може да бъде инхибирана.

Препоръчителни PCR условия

Забележка:

a) Температура на отгряване: По отношение на стойността на Tm на праймера се препоръчва температурата на отгряване да се зададе на по-малката стойност на Tm на праймера +3~5 ℃.

Често срещани проблеми и решения

1.Без насочени ленти

1) Прекомерен продукт на лизис.Изберете най-подходящото количество шаблон, обикновено не повече от 1/10 от системата;

2) Твърде голям размер на извадката.Разредете лизата 10 пъти и след това амплифициране или намалете размера на пробата и повторен лизис;

3) Тъканните проби не са пресни.Препоръчително е да се използват пресни тъканни проби;

4) Лошо качество на грунда.Използвайте геномна ДНК за амплификация, за да проверите качеството на праймера и да оптимизирате дизайна на праймера.

2.Неспецифично усилване

1) Температурата на отгряване е твърде ниска и броят на цикъла е твърде висок.Увеличете температурата на отгряване и намалете броя на циклите;

2) Концентрацията на шаблона е твърде висока.Намалете количеството шаблон или разредете шаблона 10 пъти след амплификацията;

3) Слаба специфичност на праймера.Оптимизирайте дизайна на грунда.

Бележки

1.За да се избегне кръстосано замърсяване между пробите, трябва да се подготвят множество инструменти за вземане на проби и повърхността на инструментите може да се почисти с 2% разтвор на натриев хипохлорит или препарат за почистване на нуклеинова киселина след всяко вземане на проби, ако се налага повторна употреба.

2.Препоръчва се да се използват пресни миши тъкани и обемът на пробата не трябва да бъде твърде голям, за да се избегне повлияване на резултатите от амплификацията.

3.Лизисният буфер трябва да избягва често замразяване-размразяване и може да се съхранява при 2~8 ℃ за краткосрочна многократна употреба.Ако се съхранява при ниска температура, може да се получи утаяване и трябва да се разтвори напълно преди употреба.

4.PCR Mix трябва да избягва честото замразяване-размразяване и може да се съхранява при 4 ℃ за краткотрайна повторна употреба.

5.Този продукт е само за научно експериментално изследване и не трябва да се използва при клинична диагностика или лечение.