Премикс на мултиплексна qPCR сонда
Каталожен номер: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) е предварителен разтвор за 2 × количествена PCR амплификация в реално време, характеризираща се с висока чувствителност и специфичност, която е синя на цвят и има ефект на добавяне на проба.Този продукт е 2× Mix предварително смесен реагент, който позволява до четири флуоресцентни количествени PCR реакции в една реакционна ямка.Този продукт съдържа метода на генетично модифицираните антитела за горещ старт Taq ензим, значително подобряващ чувствителността и специфичността на амплификацията.В същото време този продукт е дълбоко оптимизирал мултиреакционния буфер, който може да подобри ефективността на усилване на реакцията и да насърчи ефективното усилване на шаблони с ниска концентрация.Този продукт може да се използва за генотипиране и мултиплексен количествен анализ.
Спецификация
| Горещ старт | Вграден топъл старт |
| Метод за откриване | Откриване на праймер-сонда |
| PCR метод | qPCR |
| Полимераза | Taq ДНК полимераза |
| Тип проба | ДНК |
Условия за съхранение
Продуктът се доставя със сух лед и може да се съхранява при -25 ~ -15 ℃ в продължение на 2 години.
Инструкции
1. РеакцияСистема
| Компоненти | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| 2 × TaqMan мултиплекс qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Грундна смес (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Смес от сонда (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Референтна боя Rox | 0,5 | 1× |
| Шаблонна ДНК/кДНК | 1-10 | - |
| ddH2O | до 25 | - |
Бележки:Разбъркайте старателно преди употреба, за да избегнете прекомерни мехурчета от енергично разклащане.
а.Концентрация на праймер: Сместа на праймера съдържа множество двойки праймери, обикновено всеки праймер в крайна концентрация от 0,2 μmol/L и може също да се регулира между 0,1 и 0,5 μmol/L според случая.
b.Концентрация на сонда: Probe Mix съдържа множество сонди с различни флуоресцентни сигнали и концентрацията на всяка сонда може да се регулира между 50 и 250 nmol/L според конкретната ситуация.
1.Справка за багрило Rox: Използва се на инструмент за PCR амплификация в реално време, като например Applied Biosystems, за коригиране на грешката на флуоресцентния сигнал, генериран между ямките;този продукт не съдържа препратка към багрило Rox.Cas#10200 се препоръчва, ако е необходимо.
2.Разреждане на шаблон: qPCR е силно чувствителен и се препоръчва да се разреди шаблонът за употреба.Ако шаблонът е cDNA изходен разтвор, обемът на шаблона не трябва да надвишава 1/10 от общия обем.
3.Реакционна система: Препоръчват се 25 μL, 30 μL или 50 μL, за да се гарантира ефективността и повторяемостта на амплификацията на целевия ген.
4.Подготовка на системата: Моля, подгответе се в супер чистия стенд и използвайте накрайниците и реакционните епруветки без остатък от нуклеаза;препоръчително е да използвате накрайниците с филтърни патрони.Избягвайте кръстосано замърсяване и аерозолно замърсяване.
2.Програма за реакция
| Циклична стъпка | темп. | време | Цикли |
| Първоначално-денатурация | 95 ℃ | 5 минути | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 15 сек | 45 |
| Отгряване/удължаване | 60 ℃ | 30 сек |
Бележки:
1.Отгряване/удължаване: Температурата и времето могат да се регулират по подходящ начин според проектираната стойност на праймера Tm.
2.Получаване на флуоресцентен сигнал: Времето за придобиване на флуоресцентен сигнал, необходимо за различните инструменти за откриване на qPCR, е различно, моля, задайте според минималния срок.Времето на няколко общи инструмента е зададено, както следва:
20 секунди: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 сек.: Applied Biosystems 7300
32 сек.: Applied Biosystems 7500
Бележки
Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност!
