Универсален SYBR GREEN qPCR премикс (син)

Каталожен номер: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (базиран на багрило) е предварителен разтвор за 2 × реално време количествена PCR амплификация, характеризиращ се с висока чувствителност и специфичност, син е на цвят и има ефект на проследяване на добавяне на проба.Основният компонент Taq ДНК полимераза използва горещ старт на антитела, за да инхибира ефективно неспецифичното усилване, дължащо се на отгряване на праймера по време на подготовката на пробата.В същото време формулата добавя стимулиращи фактори за подобряване на ефективността на амплификацията на PCR реакцията и изравняване на амплификацията на гени с различно съдържание на GC (30 ~ 70%), така че количествената PCR може да получи добра линейна връзка в широко количествено регион.Този продукт съдържа специално ROX Passive Reference Dye, което е приложимо за повечето qPCR инструменти.Не е необходимо да се регулира концентрацията на ROX на различни инструменти.Необходимо е само да се добавят праймери и шаблони, за да се подготви реакционната система за амплификация.

Компоненти

Универсален син qPCR Master Mix

Условия за съхранение

Продуктът се доставя с пакети с лед и може да се съхранява при -25℃~-15℃ за 18 месеца.Необходимо е да се избягва силно светлинно облъчване при съхранение или подготовка на реакционната система.

Спецификация

Инструкции

1.Реакционна система

[Забележка]: Разбъркайте старателно преди употреба, за да избегнете прекомерни мехурчета от енергично разклащане.

a) Концентрация на праймера: Крайната концентрация на праймера е 0,2 μmol/L и може също да се регулира между 0,1 и 1,0 μmol/L според случая.

b) Концентрация на матрицата: Ако матрицата е неразреден изходен разтвор на кДНК, използваният обем не трябва да надвишава 1/10 от общия обем на qPCR реакцията.

c) Разреждане на шаблона: Препоръчва се изходният разтвор на cDNA да се разрежда 5-10 пъти.Оптималното количество добавен шаблон е по-добро, когато стойността на Ct, получена чрез амплификация, е 20-30 цикъла.

d) Реакционна система: Препоръчва се да се използват 20 μL или 50 μL, за да се гарантира ефективността и повторяемостта на амплификацията на целевия ген.

e) Подготовка на системата: Моля, подгответе се в супер чистия стенд и използвайте накрайниците и реакционните епруветки без остатък от нуклеаза;препоръчително е да използвате накрайниците с филтърни патрони.Избягвайте кръстосано замърсяване и аерозолно замърсяване.

2.Програма за реакция

Стандартна програма

Бърза програма

[Забележка]: Бързата програма е подходяща за по-голямата част от гените, а стандартните програми могат да се изпробват за отделни гени със сложна вторична структура.

a) Температура и време на отгряване: Моля, коригирайте според дължината на праймера и целевия ген.

b) Получаване на флуоресцентен сигнал (★): Моля, задайте експерименталната процедура в съответствие с изискванията в инструкциите за употреба на инструмента.

c) Крива на топене: Стандартната програма на инструмента може да се използва нормално.

3. Анализ на резултатите 

Необходими са минимум три биологични реплики за количествени експерименти.След реакцията кривата на усилване и кривата на топене трябва да бъдат потвърдени.

3.1 Крива на усилване:

Стандартната крива на усилване е S-образна.Количественият анализ е най-точен, когато стойността на Ct падне между 20 и 30. Ако стойността на Ct е по-малка от 10, е необходимо да се разреди шаблонът и да се проведе тестът отново.Когато стойността на Ct е между 30-35, е необходимо да се увеличи концентрацията на шаблона или обема на реакционната система, така че да се подобри ефективността на усилване и да се осигури точността на анализа на резултатите.Когато стойността на Ct е по-голяма от 35, резултатите от теста не могат да анализират количествено експресията на гена, но могат да се използват за качествен анализ.

3.2 Крива на топене:

Единичният пик на кривата на топене показва, че специфичността на реакцията е добра и може да се извърши количествен анализ;ако кривата на топене показва двойни или множество пикове, не може да се извърши количествен анализ.Кривата на топене показва двойни пикове и е необходимо да се прецени дали нецелевият пик е праймерен димер или неспецифична амплификация чрез електрофореза в ДНК агарозен гел.Ако това е димер на праймер, се препоръчва да се намали концентрацията на праймера или да се препроектират праймери с висока ефективност на амплификация.Ако това е неспецифично усилване, моля, увеличете температурата на отгряване или препроектирайте праймерите със специфичност.

Бележки

Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност！

Този продукт е САМО за изследователска употреба！