Мултиплекс в една стъпка RT-qPCR Premix-UNG
Каталожен номер: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) е мултиплексен количествен PCR комплект, базиран на РНК като шаблон.В процеса на експеримента в една и съща епруветка бяха извършени обратна транскрипция и количествена PCR, което опрости експерименталната операция и намали риска от замърсяване.В този комплект, първата верига сДНК е ефективно синтезирана от устойчива на топлина обратна транскриптаза и количествено амплифицирана от HotStart Tag ДНК полимераза.Комплектът съдържа основно оптимизиран MP буфер, смес от ензими и др. Буферният разтвор вече съдържа Mg2+и dNTP.Освен това се добавят факторите, които могат ефективно да инхибират неспецифичната PCR амплификация и да подобрят ефективността на амплификацията на множество qPCR реакции, което може да гарантира ефективността на амплификацията и да извърши реакция до многократна амплификация.Добавена е системата dUTP/UDG за ефективно предотвратяване на риска от аерозолно замърсяване.
Компоненти
1. Буфер
2. Ензимен микс
Спецификация
| Горещ старт | Вграден топъл старт |
| Метод за откриване | Откриване на праймер-сонда |
| PCR метод | Едноетапна RT-qPCR |
| Полимераза | Taq ДНК полимераза |
| Тип проба | ДНК |
Условия за съхранение
Продуктът се доставя със сух лед и може да се съхранява при -25~-15 ℃ за 1 година.Трябва да се избягва честотозамразяване-размразяване.Препоръчва се да се съхранява отделно.
Инструкции
1.реакция Система
| Компоненти | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| 2 × MP буфер | 12.5 | 1× |
| Ензимен микс | 1 | - |
| Смес праймер/сонда (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Матрична РНК | 1-10 | - |
| Без РНКаза H2O | до 25 | - |
Бележки:
Не забравяйте да разбъркате добре преди употреба, избягвайте прекомерни мехурчета, причинени от силни вибрации.
а.Концентрация на праймер: Смес от праймер, включително мултиплексен праймер, в зависимост от ситуацията оптималната концентрация на праймера може да бъде между 0,1 и 1,0 μM.
b.Концентрация на сондата: Смес на сондата, включително флуоресцентна група за етикетиране на мултиплексна сонда, в зависимост от ситуацията оптималната концентрация на сондата може да бъде между 0,05 и 0,5 μM.
° С.Разреждане на шаблона: qPCR е силно чувствителен и се препоръчва разреждане на шаблона.Контролната стойност на Ct е подходяща между 20 и 35.
д.Подготовка на системата: Моля, пригответе в ултрачистата работна маса и пипетата и реакционната епруветка без остатък от нуклеаза;препоръчително е да използвате главата на пистолета с филтърен елемент.Избягвайте кръстосано замърсяване и аерозолно замърсяване.
2. Оптимизирано колоезденепротокол
| Цикъл стъпка | темп. | време | Цикли |
| Обратна транскрипция | 50 ℃а | 20 минути | 1 |
| Първоначално-денатурация | 95 ℃ | 5 минути | 1 |
| Реакция на усилване | 95 ℃ | 15 сек |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30 сек c |
Бележки:
а.Обратна транскрипция: Температурата може да изберете 42°C или 50°C.
b.Реакция на амплификация: Температурата се регулира според стойността на Tm на проектираните праймери.
° С.Получаване на флуоресцентен сигнал: Моля, задайте експерименталната процедура в съответствие с изискванията на ръководството за инструмента.
Бележки
Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност.
