Едноетапен RT-qPCR SYBR зелен премикс
Каталожен номер: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix е за количествено определяне на флуоресценция на базата на багрило SYBR Green I.Използвайки генно-специфични праймери, обратната транскрипция и qPCR реакциите се извършват в една епруветка, елиминирайки необходимостта от повтарящи се операции по отваряне на капачката и пипетиране, което значително подобрява ефективността на анализа и намалява риска от замърсяване.За РНК проби, комплектът използва устойчива на топлина обратна транскриптаза за ефективен синтез на кДНК и HotStart Taq ДНК полимераза за количествена амплификация.При оптимизираната буферна система чувствителността на комплекта може да достигне до 0,1 pg за силно изразени мишени и до 1 pg за умерено експресирани мишени.Комплектът е подходящ за амплификация и количествено определяне на ДНК проби.Той позволява чувствително откриване и количествено определяне на нуклеинови киселини от различни растителни и животински проби, клетки и микроорганизми.
Компоненти
| No | Име | Сила на звука | Сила на звука |
| 1 | Разширен буфер | 250 μL | 2×1,25 мл |
| 2 | Разширена ензимна смес | 20 μL | 200 μL |
| 3 | Без РНКаза H2O | 250 μL | 2×1,25 мл |
Условия за съхранение
Този продукт трябва да се съхранява при -25~-15 ℃ далеч от светлина в продължение на 1 година.
Инструкции
1. Конфигурация на системата за реакцияd
| Компоненти | Обем (μL) | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| Разширен буфер | 12.5 | 25 | 1× |
| Разширена ензимна смес | 1 | 2 | - |
| Преден праймер (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Обратен праймер (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| РНК шаблонb | X | X | - |
| Без РНКаза H2Оc | до 25 | до 50 | - |
Бележки:
1) а.Tкрайната концентрация на праймера беше 0,2 μmol/L, която също можеше да се регулира между 0,1 и 1 μmol/L според случая.
2) б.Реагентът е изключително чувствителен, с обща РНК в диапазона от 1 pg-1 μg, а тестването на човешки проби показа оптимален вход от 1 pg-100 ng, като се контролира общата стойност на Ct в диапазона от 15-30, според случая.
3) c.Препоръчва се да се използват 20 μL или 50 μL, за да се гарантира валидността и възпроизводимостта на амплификацията на целевия ген.
4) d.Моля, подгответе се в ултра-чистата пейка и използвайте накрайници и реакционни епруветки без остатъци от нуклеаза;препоръчват се накрайници с филтърни патрони.Избягвайте кръстосано замърсяване и аерозолно замърсяване.
2.Програма за реакция
| Циклична стъпка | темп. | време | Цикли |
| Обратна транскрипция | 50 ℃a | 6 минути | 1 |
| Първоначална денатурация | 95 ℃ | 5 минути | 1 |
| Реакция на усилване | 95 ℃ | 15 сек | 40 |
| 60 ℃b | 30 сек | ||
| Етап на кривата на топене | Настройки по подразбиране на инструмента | 1 | |
Бележки:
1) а.Температурата на обратната транскрипция може да бъде избрана между 50-55°C според експерименталните нужди.За ДНК проби процесът на обратна транскрипция може да бъде пропуснат.
2) б.В специални случаи температурата на отгряване/удължаване може да се регулира според стойността на Tm на праймера, препоръчва се 60°C.
Бележки
1. Този продукт е само за изследователска употреба.
2. Моля, работете с лабораторни престилки и ръкавици за еднократна употреба, за ваша безопасност.
