2×HiF Taq плюс Master Mix
Каталожен номер: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (With Dye) е готов за употреба 2 × предварително смесен разтвор, съдържащ плюс HIF ДНК полимераза, dNTPs и оптимизиран буфер.Две моноклонални антитела при стайна температура, които инхибират полимеразната активност и 3′→5′екзонуклеазната активност, се добавят към основната смес за лесен и високоспецифичен Hot Start PCR.Факторът на разширение се добавя към основната смес, за да даде на ензима капацитет за амплификация на дълъг фрагмент, дължината на амплификацията може да бъде до 13 kb, ензимът има 5′→3′ ДНК полимеразна активност и 3′→5′ екзонуклеазна активност, нейната прецизност е 83 пъти по-голяма от тази на Taq ДНК полимераза, която е 9 пъти по-голяма от обикновената ДНК полимераза.Подходящ е за амплификация на сложни шаблони, продуктът за амплификация е тъп край.
2×HIF Taq плюс Master Mix (With Dye) има предимствата на бърз и лесен, висока чувствителност, силна специфичност, добра стабилност и т.н., реакционната система трябва само да добави праймери и шаблони и може да бъде усилена от две стъпков протокол, опростяващ експерименталните стъпки и спестяващ време.Този продукт съдържа индикаторни багрила за електрофореза, а PCR продуктите могат да се използват директно за електрофореза.Освен това продуктът съдържа и специфичен защитен агент, така че основната смес да поддържа стабилна активност след многократно замразяване-размразяване.
Условия за съхранение
Продуктите трябва да се съхраняват при -25 ~ -15 ℃ за 1 година.
Спецификации
Спецификация на продукта | Главен микс |
Концентрация | 2× |
Горещ старт | Вграден Hot Start |
Надвес | Тъп |
Скорост на реакция | Бързо |
Размер (краен продукт) | До 13kb |
Условия за транспортиране | Сух лед |
Вид на продукта | PCR премикси с висока точност |
Инструкции
1.PCR реакционна система
Компоненти | Обем (μL) |
ДНК шаблон | Подходящо |
Преден праймер (10 μmol/L) | 2.5 |
Обратен праймер (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq плюс Master Mix | 25 |
ddH2O | до 50 |
2.Препоръчително използване на различни шаблони
Тип шаблон | Увеличете фрагменти от 1 kb до 10 kb |
Геномна ДНК | 50 ng-200 ng |
Плазмидна или вирусна ДНК | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µL (Не превишавайте 10% от крайния PCR реакционен обем) |
3.Протокол за усилване
1) Протокол от две стъпки (шаблон за сложност)
Циклична стъпка | темп. | време | Цикли |
Първоначална денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98 ℃ | 10 сек | 30-35 |
Разширение | 68 ℃ | 30 сек/kb | |
Окончателно разширение | 72 ℃ | 5 минути | 1 |
2) Протокол в три стъпки (обикновен протокол)
Циклична стъпка | темп. | време | Цикли |
Първоначална денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98 ℃ | 10 сек | 30-35 |
Отгряване | 60 ℃ | 20 сек | |
Разширение | 72 ℃ | 30 сек/kb | |
Окончателно разширение | 72 ℃ | 5 минути | 1 |
3) Протокол за градиент на отгряване (шаблон за сложност)
Циклична стъпка | температура | време | Цикли |
Първоначална денатурация | 98 ℃ | 3 мин | 1 |
Денатурация | 98 ℃ | 10 сек | 15 (1 ℃ намаление на цикъл) |
Градиентно отгряване | 70-55 ℃ | 20 сек | |
Разширение | 72 ℃ | 30 сек/kb | |
Денатурация | 98 ℃ | 10 сек |
20 |
Отгряване | 55 ℃ | 20 сек | |
Разширение | 72 ℃ | 30 сек/kb | |
Окончателно разширение | 72 ℃ | 5 минути | 1 |
Характеристики при различен протокол за усилване
Протоколl | Две стъпки | Тристепенен | Градиентно отгряване |
спец. | бърз | среден | бавен |
Специфичност | Високо | среден | Високо |
PCR добив | среден | Високо | среден |
Скорост на откриване | Високо | среден | Високо |
Бележки
Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност!