BspQI
BspQI може да бъде рекомбинантно експресиран в E. coli, който може да разпознае специфични места и се произвежда под
BspQI, рестрикционна рестрикционна ендонуклеаза IIs, е получена от рекомбинантен щам на Е. coli, който носи клонирания и модифициран BspQI ген от Bacillus sphaericus.Той може да разпознае специфични места, а последователността на разпознаване и местата на разцепване са както следва:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Характеристики на продукта
1. Висока активност, Бързо храносмилане;
2. Ниска звездна активност, осигуряваща точно рязане като „скалпел”;
3. Без BSA и без животински произход;
Чувствителност към метилиране
Dсъм метилиране:Не е чувствителен;
Dcm метилиране:Не е чувствителен;
CpG метилиране:Не е чувствителен;
Условия за съхранение
Продуктът трябва да бъде изпратен при ≤ 0℃;Съхранявайте при -25 ~ - 15 ℃ условия.
Буфер за съхранение
20 mM Tris-HCl, 0.1 mM EDTA, 500 mM KCI, 1.0 mM дитиотреитол, 500 µg/ml рекомбинантен албумин, 0.1% Trition X-100 и 50% глицерол (рН 7.0 при 25°C).
Определение на единица
Една единица се дефинира като количеството ензим, необходимо за смилане на 1 µg ДНК за вътрешен контрол за 1 час при 50°C в общ реакционен обем от 50 µL.
Контрол на качеството
Тест за чистота на протеин (SDS-PAGE):Чистотата на BspQI е ≥95%, определена чрез SDS-PAGE анализ.
РНКаза:10U от BspQI с 1,6 μg MS2 РНК за 4 часа при 50 ℃ не води до разграждане, както е определено чрез електрофореза в агарозен гел.
Неспецифична DNase активност:10U BspQI с 1 μg λ ДНК при 50 ℃ за 16 часа, в сравнение с 50 ℃ за 1 час, не дава излишък на ДНК, както е определено чрез електрофореза в агарозен гел.
Лигиране и повторно изрязване:След смилане на 1 μg λDNA с 10U BspQI, ДНК фрагментите могат да бъдат лигирани с Т4 ДНК лигаза при 16ºC.И тези лигирани фрагменти могат да бъдат повторно срязани с BspQI.
E. coli ДНК: E. coli 16s rDNA-специфична TaqMan qPCR детекция показа, че геномният остатък на E.coli ≤ 0,1 pg/ul.
Остатък от протеин на гостоприемника:≤ 50 ppm
бактериални Ендотоксин: LAL-тест, съгласно изданието на Китайската фармакопея IV 2020 г., метод за тестване на границата на гела, общо правило (1143).Съдържанието на бактериален ендотоксин трябва да бъде ≤10 EU/mg.
Реакционна система и условия
| Компонент | Сила на звука |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| ДНК | 1 μg |
| 10 x BspQ I буфер | 5 μL |
| дд Н2О | До 50 μL |
Условия на реакция: 50 ℃, 1~ 16 ч.
Топлинна инактивация: 80°C за 20 минути.
Препоръчваната реакционна система и условия могат да осигурят сравнително добър ефект на храносмилане на ензими, което е само за справка, моля, вижте експерименталните резултати за подробности.
Приложение на продукта
Рестрикционно ендонуклеазно смилане, Бързо клониране.
Бележки
1. Обемът на ензима ≤ 1/10 от реакционния обем.
2. Звездна активност може да възникне, когато концентрацията на глицерол е повече от 5%.
3. Активност на разцепване може да възникне, когато субстратът е под препоръчителното съотношение.
