UDG/UNG Ензими
UDG (урацил ДНК гликозилаза) може да катализира хидролизата на N-гликозидната връзка между урацил базата и захарно-фосфатния скелет в ssDNA и dsDNA.Той може лесно да контролира аерозолното замърсяване и е подходящ за общи системи за молекулярна биология като PCR, qPCR, RT-qPCR и LAMP.
Спецификации
| Хост на израза | Рекомбинантен Е. coli с урацил ДНК гликозилазен ген |
| Молекулно тегло | 24. 8kDa |
| Чистота | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Топлинно инактивиране | 95℃, 5~10 мин |
| Определение на единица | Една единица (U) се определя като количеството ензим, необходимо за катализиране на хидролизата на l μg dU-съдържаща dsDNA за 30 минути при 25 ℃. |
Съхранение
Продуктът трябва да се съхранява при -25℃~-15°C в продължение на две години.
Инструкции
1.Приготвяне на PCR реакционната смес съгласно следната система
| Компоненти | Обем (μL) | Крайна концентрация |
| 10 × PCR буфер (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/излужване) | 1 | 0,2 mmol/излугване |
| Шаблонна ДНК | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Праймер 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq ДНК полимераза (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Урацил ДНК гликозилаза (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH2O | До 50 | - |
Забележка: Съгласно експерименталните изисквания, крайната концентрация на dUTP може да се регулира между 0,2-0,6 mmol/L и 0,2 mmol/L dTTP може да се добави селективно.
2.Процедура за усилване
| Циклична стъпка | температура | време | Цикли |
| деградация на dU-съдържащ шаблон | 25 ℃ | 10 минути | 1 |
| UDG активиране, първоначална денатурация на шаблона | 95 ℃ | 5 ~ 10 минути | 1 |
| Денатурация | 95 ℃ | 10 сек |
30-35 |
| Отгряване | 60 ℃ | 20 сек | |
| Разширение | 72 ℃ | 30 сек/kb | |
| Окончателно разширение | 72 ℃ | 5 минути | 1 |
Забележка: Времето за реакция при 25°C може да се регулира в рамките на 5-10 минути според експерименталните изисквания.
Бележки
1.UDG е активен в повечето PCR реакционни буфери.
2.Ензимите трябва да се съхраняват в кутия с лед или на ледена баня, когато се използват, и трябва да се съхраняват при -20°C веднага след употреба.
3.Моля, носете необходимите ЛПС, като лабораторна престилка и ръкавици, за да гарантирате вашето здраве и безопасност!
